一、背景
蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA KIT采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中的蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)。用蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。
抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。
蘇云金芽孢桿菌，英文名稱：Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt，是一種產(chǎn)晶體蛋白的好氣性蠟狀芽孢桿菌。蘇云金桿菌（B．t）制劑是胃毒劑，進(jìn)入昆蟲消化道后，伴孢晶體（主要成分為蛋白質(zhì)）被昆蟲堿性腸液破壞成較小單位的δ-內(nèi)毒素，使中腸停止蠕動(dòng)、癱瘓，中腸上皮細(xì)胞解離、停食，芽孢則在腸中萌發(fā)，經(jīng)被破壞的腸壁進(jìn)入血腔，大量繁殖，使害蟲得敗血癥而死，死亡幼蟲身體癱軟，呈黑色。
目前已知蘇云金桿菌有30多個(gè)變種，某些變種營(yíng)養(yǎng)體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)時(shí)期產(chǎn)生β-外毒素，耐熱，是一種腺嘌呤核苷酸，也起殺蟲作用。蘇云金桿菌（B．t）及其混配制劑已用于防治蔬菜、水稻、玉米、棉、果樹(shù)、茶樹(shù)和林區(qū)等害蟲。如防治菜青蟲、小菜蛾、稻苞蟲、稻縱卷葉螟、玉米螟、棉鈴蟲、棗盡蠖、松毛蟲、煙青蟲、茶卷蛾、茶尺蠖等百種蟲害，是應(yīng)用最廣的微生物殺蟲劑。
二、應(yīng)用
用于Bt水稻外源基因及其表達(dá)蛋白的環(huán)境持留研究：
Bt抗蟲水稻的外源基因及其表達(dá)產(chǎn)物可能是一類潛在的環(huán)境外源污染物,有關(guān)這類生物大分子在農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中的環(huán)境行為等方面的研究已成為國(guó)內(nèi)外新的研究熱點(diǎn),具有重要的科學(xué)和現(xiàn)實(shí)意義。目前關(guān)于Bt抗蟲水稻的研究主要集中在表達(dá)Cry1Ab蛋白的Bt抗蟲水稻(如克螟稻)上,而這類Bt抗蟲水稻大多含有標(biāo)記基因(hpt,npt11),對(duì)于從環(huán)境安全性角度考慮而育成的沒(méi)有標(biāo)記基因的Bt水稻的相關(guān)研究較少。
本文以Bt抗蟲水稻(華池B6、TT51)與其親本(嘉早935、明恢63)及親緣較遠(yuǎn)但農(nóng)藝性狀相近的水稻品種(中九B、R9311)為試材,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室和田間試驗(yàn),主要采用ELISA檢測(cè)和同位素標(biāo)記等方法研究了(1)Bt抗蟲水稻植株中Bt蛋白含量的時(shí)空表達(dá)及其在根際土中的持留規(guī)律；(2)轉(zhuǎn)基因水稻秸稈還土后外源蛋白的持留規(guī)律；(3)Bt抗蟲水稻TT51秸稈還土對(duì)土壤中可培養(yǎng)微生物的影響；(4)Bt基因在土壤中的降解動(dòng)態(tài)及向土壤微生物水平轉(zhuǎn)移的可能性初探。
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