一、背景
原代細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)原代細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)原代細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)基（cell culture medium）是人工模擬動物細(xì)胞的體內(nèi)生長環(huán)境，維持體外細(xì)胞存活和增殖的營養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ)，其主要功能是為細(xì)胞提供適宜的pH和滲透壓，以及細(xì)胞本身不能合成的各種營養(yǎng)物質(zhì)。
原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首次培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時間短，遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。最常用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。
按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。
與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的做法是添加5~10%的血清，這樣才能維持細(xì)胞活力，促進(jìn)細(xì)胞增殖。針對不同的動物細(xì)胞，現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個性化的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基配方，營養(yǎng)成份更加豐富，血清使用量可降低至1～3%，由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響。
二、應(yīng)用
用于人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的研究：
應(yīng)用組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察采集臍帶后不同處理時間、以及臍帶凍存復(fù)蘇后臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離成功率、生長增殖情況等,探討組織塊貼壁分離法用于間充質(zhì)干細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)擴(kuò)增的可行性。
實(shí)驗(yàn)采用DF12培養(yǎng)基對2-3mm3大小的人臍帶組織塊進(jìn)行貼壁培養(yǎng),觀察不同處理時段的臍帶組織原代細(xì)胞獲得時間、細(xì)胞得率等情況。結(jié)果表明,24小時以內(nèi)處理的組織細(xì)胞分離成功率100%(6/6),得到原代細(xì)胞的平均時間17.33±0.84天,平均得到4.03±0.97×104個細(xì)胞/cm；
24-48小時組的分離成功率為92%(11/12),得到原代細(xì)胞的平均時間為為22.00±1.72天,平均可獲得1.22±0.24×104個細(xì)胞/cm；
48-72小時組的分離成功率降至87%(13/15),平均獲得原代細(xì)胞的時間為21.69±2.15天,平均獲得1.01±0.22×104個細(xì)胞/cm。
液氮儲存復(fù)蘇組分離成功率為100%(10/10),得到原代細(xì)胞的平均時間為20.60±2.13天,平均可獲得2.08±0.30×104個細(xì)胞/cm。
結(jié)果表明,隨著臍帶組織處理時間延長,分離成功率下降,平均每厘米臍帶組織獲得原代細(xì)胞數(shù)量降低,臍帶組織塊凍存復(fù)蘇后可以獲得人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
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