一、大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒的簡介
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒適用于從動物組織中分離血管內(nèi)皮細(xì)胞,無菌條件下所分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用。
二、大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)操作流程
1、勁椎脫臼處死大鼠,75%酒精中浸泡1分鐘,打開胸腔,分離主動脈,放在無菌的D-Hanks液培養(yǎng)皿中。
2、用眼科剪和鑷子出去血管外周的脂肪和纖維組織,用含抗生素的D-hanks沖洗血管內(nèi)外凝血數(shù)次,再放入另一無菌培養(yǎng)皿中。
3、用眼科剪縱向剪開血管,用手術(shù)刀將其切成1立方毫米大小的動脈植塊,然后種植到培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿用1%明膠37℃下過夜,使用前2h移入二氧化碳培養(yǎng)箱中,用時可以先經(jīng)含10%小牛血清的培養(yǎng)液沖洗)。將動脈植塊的內(nèi)膜面與皿底接觸,種植密度約1塊/立方厘米。
4、培養(yǎng)皿中靜置2h (干貼壁),然后加入0.5ml含25%胎牛血清的培養(yǎng)液,略微蓋過動脈植塊內(nèi)膜面。24h后,更換培養(yǎng)液,加入2-3ml培養(yǎng)液。
5、72h左右,當(dāng)觀察到內(nèi)皮細(xì)胞充分長出,而成纖維細(xì)胞剛要長出的時候,將動脈植塊除去,刮出成纖維細(xì)胞,換培養(yǎng)液1次,以后每兩天換液1次,每次換1/2一1/3的液量。 繼續(xù)培養(yǎng)8-10d,細(xì)胞融合成單層即可傳代。
三、大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒的應(yīng)用
血管內(nèi)皮細(xì)胞是鋪陳于血管內(nèi)壁的一層多功能細(xì)胞,在血管通透性屏障、免疫防御及炎性反應(yīng)中起著極其重要的作用叫。大量研究顯示,血管內(nèi)皮是許多心血管疾病或危險因子作用的重要靶器官,具有相當(dāng)活躍的內(nèi)分泌和代謝功能。血管內(nèi)皮細(xì)胞具有多重的生物學(xué)特性,而大鼠是主要的實(shí)驗(yàn)動物,因此建立大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法對于研究內(nèi)皮細(xì)胞特性、對作用于血管的藥物及抗腫瘤藥物的研究具有重要意義。
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