一、背景
菌種培養(yǎng)基用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標準)，成分（g/L）：胰蛋白胨：10.0；牛肉浸粉：5.0；氯化鈉：2.5；瓊脂：14.0；pH值6.4-6.6。
檢驗原理：胰蛋白胨提供碳源和氮源;牛肉膏提供維生素和氨基酸;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;氯化鈉能維持均衡的滲透壓。
用法：稱取本品31.5克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘備用。
蠟樣芽孢桿菌（學名：Bacillus cereus），又稱仙人掌桿菌，是一種革蘭氏陽性菌，β溶血性的桿狀細菌。
蠟樣芽孢桿菌是兼性厭氧性。與其他芽孢桿菌相同，它會產(chǎn)生防御性的內(nèi)芽孢。它的致病因子包括施普善（cereolysin）和磷脂酶C（Phospholipase C）。
菌體細胞桿狀，末端方，成短或長鏈，1.0～1.2×3.0～5.0微米。產(chǎn)芽孢，芽孢圓形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊無明顯膨大。
革蘭氏陽性，無莢膜，運動。菌落大，表面粗糙，扁平，不規(guī)則。菌落形態(tài)：在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，培養(yǎng)24 h，可形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無色素、稍有光澤的白色菌落(似蠟燭樣顏色)直徑5-7 mm。
在M.Y.P培養(yǎng)基上生長更旺盛，菌落直徑達8-10 mm，質(zhì)地更軟，挑起來呈絲狀，培養(yǎng)時間稍長，菌落表面呈毛玻璃狀，并產(chǎn)生紅色色素。
在蛋白胨酵母膏平板上菌落為灰白色，不透明，表面較粗糙，似毛玻璃狀或融蠟狀，菌落較大。
蠟狀芽胞桿菌細菌對外界有害因子抵抗力強，分布廣，是典型的菌體細胞，有部分菌株能產(chǎn)生腸毒素，呈桿狀(約1.5μm)，有色，孢子呈橢圓形，有致嘔吐型和腹瀉型胃腸炎腸毒素兩類。
二、應用
用于產(chǎn)細菌素蠟樣芽孢桿菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)基優(yōu)化研究：
以金黃色葡萄球菌為指示菌，從土壤中分離篩選得到目的菌株，命名為XH25。在排除有機酸與過氧化氫實驗以及蛋白酶K敏感試驗后綜合推測出菌株XH25的抑菌效果可能來源于細菌素。
篩選得到的XH25菌株的各項生理生化測定結果顯示：革蘭氏染色試驗、過氧化氫酶試驗、淀粉水解試驗、硝酸還原試驗、酯酶試驗、M.R試驗、V.P試驗、卵磷脂酶水解試驗、酪素水解試驗和糖醇類發(fā)酵試驗都呈陽性，H2S試驗呈陰性；再結合菌株XH25的16S rRNA分子鑒定通過序列比對分析、系統(tǒng)發(fā)育樹的構建，鑒定出菌株XH25為蠟樣芽孢桿菌。
采用Plackett-Burman（簡稱PB）試驗設計和響應面分析法（Response surface methodology，簡稱RSM）對菌株XH25的發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化。先用Plackett-Burman試驗設計篩選出對細菌素產(chǎn)生有顯著影響的因素，確定影響細菌素產(chǎn)生的主要成分；然后通過最陡爬坡試驗找出RSM設計的中心點；最后利用RSM分析法對培養(yǎng)基進行優(yōu)化。
優(yōu)化結果表明，培養(yǎng)基的最優(yōu)組合為：可溶性淀粉15.32g/L、硫酸銨6.02g/L、大豆蛋白胨12.5g/L、硫酸鎂0.25g/L、培養(yǎng)基pH6.15、溫度30℃時，抑菌圈直徑比優(yōu)化前提高了21.7%。通過模型驗證試驗得出實際值12.90mm與模型預測值12.76mm有很好的擬合性，說明實驗準確性高。
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