一、背景
玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基可以用于藥品和生物制品中霉菌和酵母菌的計數(shù)、分離和培養(yǎng)用。成分(g/L)蛋白胨5.0；；葡萄糖10.0；；磷酸二氫鉀1.0；硫酸鎂0.5；玫瑰紅鈉0.0133；瓊脂14.0；pH6.0±0.2 25℃。
霉菌是真菌的一種，其特點是菌絲體較發(fā)達(dá)，無較大的子實體。同其他真菌一樣，也有細(xì)胞壁，寄生或腐生方式生存。霉菌有的使食品轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸疚镔|(zhì)，有的可能在食品中產(chǎn)生毒素，即霉菌毒素。自從發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素以來，霉菌與霉菌毒素對食品的污染日益引起重視。對人體健康造成的危害極大，主要表現(xiàn)為慢性中毒、致癌、致畸、致突變作用。
酵母是單細(xì)胞微生物。它屬于高等微生物的真菌類。有細(xì)胞核、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁、線粒體、相同的酶和代謝途徑。酵母無害，容易生長，空氣中、土壤中、水中、動物體內(nèi)都存在酵母。有氧氣或者無氧氣都能生存。
酵母是兼性厭氧生物，未發(fā)現(xiàn)專性厭氧的酵母，在缺乏氧氣時，發(fā)酵型的酵母通過將糖類轉(zhuǎn)化成為二氧化碳和乙醇（俗稱酒精）來獲取能量。
檢驗原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須的微量元素；玫瑰紅鈉作為選擇性抑菌劑可抑制細(xì)菌的生長，并可減緩某些霉菌因生長過快而導(dǎo)致菌落漫延生長；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
用法：稱取本品31.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘備用。
二、應(yīng)用
用于蘋果炭疽葉枯病菌T-DNA插入突變體的致病和生物學(xué)特性研究：
近年來,由膠孢炭疽菌（C.gloeosporioides）引起的蘋果炭疽葉枯病成為我國蘋果生產(chǎn)中的重要病害。
從以ATMT方法構(gòu)建的該病原菌突變體庫中選擇了16個突變體菌株進行了致病性和生物學(xué)研究,篩選鑒定出6個致病相關(guān)基因,明確了不同突變菌株的最佳生長和產(chǎn)孢條件。為該病原菌致病機制的進一步研究和炭疽葉枯病治理提供了理論和材料基礎(chǔ)。
研究結(jié)果如下:通過蘋果果實有傷接種實驗,篩選出6個致病性變化的突變體,其中突變體A4204、M44、A3638及A1598完全喪失致病性,突變體A1919和A1643致病性減弱。突變體菌株A3638在所有培養(yǎng)基中生長速度顯著下降,說明該基因調(diào)控病菌的營養(yǎng)生長。對突變體的產(chǎn)孢能力測定結(jié)果表明:相較于野生型菌株Stj16,突變體A4202產(chǎn)孢能力顯著增強,而4個插入突變體M44、A2983、A3144和G1183的產(chǎn)孢量顯著降低,推測A4202基因可能對病菌產(chǎn)孢具負(fù)調(diào)控作用,而M44等四個基因具有正調(diào)控作用。
生物信息學(xué)分析和蛋白亞細(xì)胞定位研究結(jié)果表明,A4202可能通過調(diào)控細(xì)胞分裂而影響病菌產(chǎn)孢。生物學(xué)形狀觀測結(jié)果:1)菌株在玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA）上生長速度下降,但產(chǎn)孢能力顯著升高;2)多數(shù)菌株的生長適應(yīng)酸堿范圍為p H4.0～8.0,但是突變體菌株A4202在此范圍內(nèi)生長較差,而突變菌株M44只有在p H8.0時才正常生長;3)多數(shù)突變體菌株在光暗交替培養(yǎng)條件下產(chǎn)孢量較大,但突變株菌株A1764在持續(xù)暗培養(yǎng)條件下產(chǎn)孢量相對較大。
上述生物學(xué)研究結(jié)果,為進一步開展相關(guān)基因的機理研究提供了最佳培養(yǎng)方法。菌株的最適生長溫度測定結(jié)果表明:多數(shù)突變提菌株和野生型菌株Stj16的最佳生長溫度均為25?C～30?C,相較于其他溫度環(huán)境,Stj16在30C時產(chǎn)孢量最高,進一步解釋了該病菌在田間的發(fā)病條件和規(guī)律,即在夏季高溫高濕條件下極易爆發(fā)為害。