熒光假單胞菌(P.Fluorescens)是一種環(huán)境污染菌。對于人類是一種罕見的機會致病菌。熒光假單胞菌屬于假單胞菌屬,是化能異養(yǎng)型的革蘭氏陰性菌,呈桿狀,有鞭毛。能分泌黃綠色熒光色素發(fā)出熒光,能產(chǎn)生抗生素、水解酶等代謝產(chǎn)物,在 4℃-37℃范圍內(nèi),中性環(huán)境中生長,生理生化特性顯著,是作為嗜冷菌是牛奶中危害最大的微生物。
一、培養(yǎng)特征
熒光假單胞菌是典型的革蘭氏陰性菌,電鏡觀察其菌體呈桿狀,對數(shù)生長期時大小一般為(0.7~0.8)μm×(2.3~2.8)μm,呈單個或成對排列,具有極生鞭毛,偶見無鞭毛無動力的菌株,運動活潑,不形成芽孢。DNA的G+C比例范圍為59.4~61.3克分子%,生物型IV有最低值,生物型II有最高值。該菌能液化明膠,葡萄糖發(fā)酵、蔗糖發(fā)酵、乳糖發(fā)酵均為陽性,并且能以多種醇類物質(zhì)作為碳源,不能利用乙醇、L-鼠李糖等。甲基紅試驗、檸檬酸鹽發(fā)酵、接觸酶反應(yīng)均為陽性,水解淀粉、脂酶反應(yīng)陰性,對青霉素有抗性,不產(chǎn)生綠膿菌素。
具有分解纖維素、蛋白質(zhì)和結(jié)合Fe3+的能力,但不能分解幾丁質(zhì)。有些菌株(生物型II,III和IV)能進行反硝化,生物型I和III在卵黃反應(yīng)中為陽性,生物型I一般可分解脂肪,生物型II不解脂。營專性好氧生活,可在pH5.7和7%NaCl的環(huán)境中生長,最適生長溫度約25~30℃。大多數(shù)菌株在4℃或4℃以下生長,在41℃不生長。
熒光假單胞菌在KMB固體培養(yǎng)基上于28℃下培養(yǎng)2d后,生長良好,菌落微隆起,磚紅色,邊緣呈波浪花紋向外擴展,表面較濕潤稍凸起不透明,易用接種針挑起,與該菌屬下其他種類的典型區(qū)別在于能產(chǎn)生水溶性的黃綠色素(青膿素),紫外線(366nm)斜光照射下可見黃綠色熒光。熒光假單胞菌在普通培養(yǎng)基、麥康凱、沙門和志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基平板上均可生長。在PDA培養(yǎng)基上長勢極弱或不生長,菌落深紅色。
微生物的良好生長需要培養(yǎng)基各組分濃度和比例合適,碳源和氮源對菌體的生長或蛋白的表達影響較大,濃度太低會造成營養(yǎng)缺乏,限制菌體正常生長,進而影響代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。國內(nèi)外一些學(xué)者對熒光假單胞菌的最佳生長條件做了研究,對一些促生菌和生防菌的最適培養(yǎng)條件進行了測定和分析,為菌株的最佳發(fā)酵條件和生態(tài)適應(yīng)性評價提供了依據(jù)。
二、風(fēng)險提示
熒光假單胞菌除了可以防治植物的病害之外,本身還是一種環(huán)境污染菌。在日常生活中,熒光假單胞菌是奶類、蛋類在低溫保存條件下導(dǎo)致腐敗變質(zhì)的主要細菌之一。熒光假單胞菌對于人類是一種罕見的機會致病菌。在臨床上最多見的是血液及血制品被熒光假單胞菌污染,當(dāng)病人輸入了被熒光假單胞菌污染的血液及血制品后,可出現(xiàn)敗血癥、感染性休克和血管內(nèi)凝血等嚴(yán)重后果。
由于現(xiàn)有的許多抗生素對熒光假單胞菌都不敏感,所以一旦感染此菌,病死率很高。熒光假單胞菌還可以使一些動物體發(fā)生病變,產(chǎn)生相應(yīng)的癥狀。在植物體中,熒光假單胞菌可以協(xié)同一些病蟲害加重對植物體的危害,如研究發(fā)現(xiàn),松材線蟲在結(jié)合有毒的熒光假單胞菌時,能夠促進黑松的致病率。熒光假單胞菌對動植物的危害受到外部環(huán)境的影響,越有利于熒光假單胞菌生長的環(huán)境就對動植物的危害越大。
隨著接種冰核細菌的濃度增加,煙株的凍害程度逐漸加劇。假單胞菌屬中除了熒光假單胞菌之外,其他的假單胞菌也能造成環(huán)境的污染。研究發(fā)現(xiàn)寧波沿海陸源排污口中存在較多的假單胞菌屬,假單胞菌屬的含量與排污口的主要污染物有關(guān),氨氮含量較高的排污口假單胞菌屬的含量更高。還推測與季節(jié)性溫度變化有關(guān)。
三、生物學(xué)作用
以原核生物16S保守序列設(shè)計引物,用PCR方法,從熒光假單胞菌基因組中擴取其16S保守序列,連接到T-載體,以設(shè)計好的限制性內(nèi)切酶,分別切割表達載體(pET32a、pMAL-c2、pGEX-6p-1 )和目的基因,然后將目的基因與表達載體連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達宿主菌(BL21、Origami),并以酶切方法驗證連接的正確性;誘導(dǎo)表達后即可得到LPL(脂蛋白脂肪酶)
熒光假單胞菌 (Pseudomonas fluorescens)
分類學(xué)上屬于細菌域、變形菌門、γ-變形菌綱、假單胞菌目、假單胞菌科的假單胞菌屬。細胞為直的桿菌,大小為0.7-0.8X2.3-2.8 微米,不產(chǎn)芽孢,革蘭氏染色陰性。有數(shù)根極生鞭毛,運動。需氧,進行嚴(yán)格的呼吸型代謝,以氧為最終電子受體。能以硝酸鹽為替代的電子受體進行厭氧呼吸?;軤I養(yǎng)異養(yǎng),不需要有機生長因子。氧化酶陽性,接觸酶陽性。能利用葡萄糖和果糖,有些菌株能從蔗糖合成果聚糖,明膠液化。生長溫度范圍 4-37℃,最適生長溫度是25-30℃。 DNA中G+C 含量是60-61%。廣泛分布于自然界,如土壤、水、植物及動物活動環(huán)境中。該菌生化能力活躍,可降解許多人工合成化合物,常被用于環(huán)境保護。
還是一種重要的植物根際促生細菌,是已知植物根際有益微生物中種群數(shù)量較多的細菌種類之一。該菌營養(yǎng)需要相對簡單,能夠利用根系分泌物中大部分營養(yǎng)迅速在植物根圍定殖。其中一些菌株具有促進植物生長和防治病害的作用,因而可能用于植物病害的生物防治。
四、臨床意義
可從傷口、痰、胸水、尿和血液中分離出來,也可從血庫存在中分離出??稍诒鋬Υ娴难杭把褐破分蟹敝?,而且自溶后釋放內(nèi)毒素。其內(nèi)毒素的磷脂部分,可導(dǎo)致輸血后不可逆的休克。
五、相關(guān)污染事例
【北京工商局稱“發(fā)光豬肉”為細菌引起】北京市工商局13日回應(yīng)稱,北京市食品安全監(jiān)控中心對送檢“發(fā)光豬肉”樣本進行了檢測,送檢樣本均未檢出熒光增白物質(zhì),但檢出了熒光假單胞菌。專家表示,這種細菌并不可怕,對正常人群不具有致病性,只要豬肉本身沒有腐敗變質(zhì),煮熟即可殺滅該細菌。
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