一、產品信息
平臺編號：Bio-109760
規(guī)格：500ml
相關信息：/
細胞名稱：原代神經元細胞培養(yǎng)體系
用途：細胞專用培養(yǎng)基
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）
二、產品介紹
原代神經元細胞培養(yǎng)體系是一個為體外生長的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的神經元細胞設計的理想的無血清完全培養(yǎng)基方案。本體系是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO2的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、微量元素、B27等生長因子和一些其他的有機和無機化合物。本培養(yǎng)體系是基于固定配方配制的液態(tài)培養(yǎng)體系，可以為體外培養(yǎng)的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的神經元細胞提供一個確定適宜的平衡營養(yǎng)環(huán)境，并且可以選擇性的維持神經元細胞的生存。
三、體系組成
名稱 體積 濃度 保存條件
原代神經元細胞基礎培養(yǎng)基 500ml 1× 4℃、避光
原代神經元細胞培養(yǎng)添加劑 10ml 50× -20℃、避光
雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光
四、產品的運輸和保存
放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸（體系中的各組分請按上述列表中的條件進行儲存）
五、產品使用
1)本產品僅能用于科研
2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核
3)本產品未通過用于活體診斷的審核
六、培養(yǎng)方法
1、孕18天（E18d）SD大鼠。
2、培養(yǎng)板處理，每孔加0.01％多聚賴氨酸（PDL）蓋沒底部，過夜移去。
3、無菌水洗2次后，加DMEM＋10％BS培養(yǎng)液平衡。
4、SD大鼠戊巴比妥麻醉，先用碘酒消毒大鼠腹部，再用75％乙醇消毒，切開子宮取胎鼠，移入超凈臺中，去除胎盤和臍帶，將胎鼠放入另一無菌平皿中。
5、直接取腦。直頭鑷子將頭部膜去除，如果不易去除，用尖頭鑷子刺一下；用彎頭鑷子將腦取出。
6、剝腦（取紋狀體組織，去除腦膜血管），解剖顯微鏡下除去小腦，將大腦左右半球沿中縫分開，鑷子去除中腦部分，然后將腦膜去除（去除腦膜主要是除去上皮細胞）。將去除腦膜后的半腦盡量分開，確認嗅球的位置，輕輕將皮層展開。嗅球后面顏色深的部分即為紋狀體，海馬為半透明月牙狀。將組織放入4度的D－Hanks溶液中。
7、移去D－Hanks溶液，用虹膜剪將組織剪成1×1×1mm3的小塊。
8、取0.125％胰酶（溶解在D－Hanks）5mL，加入20μL 25mg/mL Dnase，放入10mL離心管中，將剪碎的組織放入胰酶，37度消化15min，消化過程中輕搖2～3次。
9、將消化后的組織移入另一離心管，用DMEM＋10％BS 終止反應。DMEM＋10％BS加至6mL。
10、用火焰刨光的玻璃滴管輕輕吹打數(shù)次，靜止2-3min，吸出上層細胞懸液至50mL離心管中，剩下的另加入DMEM＋10％BS至6mL，用滴管輕吹數(shù)次，移入至50mL離心管中。
11、細胞計數(shù)。用DMEM＋10％BS培養(yǎng)液調整細胞密度，接種在35mm皿中。（計數(shù)時，稀釋5倍計數(shù)）。細胞數(shù)目7～8×105個 /mL，6孔板加入1mL。
12、5小時后換成全部Neurobasal＋B27 2％，以后每隔2～3天進行1/3-1/2量換液。
七、注意事項
1、僅限科研用。
2、培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
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