實驗室微生物污染類型及實驗室污染解決辦法！
小楊 / 2023-06-13 08:57:30
百歐博偉生物：實驗室污染雖然無法完全消除，但可以通過全面了解其來源并遵循良好的無菌技術(shù)來降低污染的發(fā)生頻率和嚴重性。這里將概述主要的生物污染類型以及一種新型的實驗室微生物污染解決辦法。
1、細菌
細菌是一大類普遍存在的單細胞微生物。細菌的直徑通常只有幾微米，其形狀多樣，如球狀、桿狀和螺旋狀等。由于分布廣泛、生長迅速和體積大小等特點，細菌以及酵母和霉菌是細胞培養(yǎng)中最常見的生物污染物。細菌污染在培養(yǎng)物感染后幾天內(nèi)就很容易被肉眼觀察到；受感染的培養(yǎng)物通常會變得渾濁，有時表面會有一層薄膜。經(jīng)常還會出現(xiàn)培養(yǎng)基的pH值突然下降的情況。在低倍顯微鏡下，細菌以細小顆粒的形式出現(xiàn)在細胞之間，在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個細菌的形狀。下面的模擬圖像顯示了貼壁培養(yǎng)的293細胞被大腸桿菌污染。
2、酵母
酵母是真菌界中的單細胞真核微生物，大小從幾微米（常見）到40μm（罕見）不等。與細菌污染一樣，被酵母污染的培養(yǎng)物會變得混濁，尤其是在污染的后期。被酵母污染的培養(yǎng)物，其pH值幾乎沒有變化，通常直到污染嚴重時，pH值才會升高。在顯微鏡下，酵母呈單個卵球形或球形顆粒，可能還會出芽產(chǎn)生更小的顆粒。下面的模擬圖像顯示了貼壁293細胞鋪板24小時后被酵母感染的情況。
3、黑膠蟲
黑膠蟲是一種生物還是非生物，學(xué)術(shù)界至今還有爭議。這里我們暫且將其認作是一種微生物。黑膠蟲污染主要來源于血清。黑膠蟲的出現(xiàn)常在培養(yǎng)條件改變、細胞接種密度降低、細胞狀態(tài)不佳時顯現(xiàn)并使實驗中斷，尤其在凍存細胞復(fù)蘇時可造成大量細胞死亡。黑膠蟲生長與細胞的生長有此消彼長的關(guān)系，即當細胞狀態(tài)好時小黑點會相應(yīng)的減少；反之則增加，似乎有細胞競爭生長的關(guān)系。
黑膠蟲污染的特點是起初對細胞并無影響，當達到一定數(shù)量時則會影響細胞生長。受黑膠蟲污染的細胞液通常清亮無變化，在高倍顯微鏡下可以觀察到點狀片狀的游動小體，做布朗運動。
4、支原體
支原體是最小的（0.3μm）能夠自我復(fù)制的有機體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。支原體沒有細胞壁，對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細胞正常功能喪失的時候，才意識到是發(fā)生了支原體感染。一些生長緩慢的支原體可在培養(yǎng)物中持續(xù)存活，而不會導(dǎo)致細胞死亡，但它們可以改變培養(yǎng)體系中宿主細胞的行為和代謝。慢性支原體感染的可能表現(xiàn)包括：細胞增殖率降低、飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集；但是，檢測支原體污染的唯一可靠方法是通過使用熒光染色（例如Hoechst33258染色）、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或微生物測定法定期檢測培養(yǎng)物。
5、霉菌
霉菌是真菌界的真核微生物，以多細胞絲狀體生長，稱為菌絲。這些多細胞絲狀體構(gòu)成的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)含有遺傳性相同的細胞核，被稱為集落或菌絲體。與酵母污染相似，培養(yǎng)物的pH值在污染的初期保持穩(wěn)定，然后隨著培養(yǎng)物感染程度加劇而迅速增加，并變得渾濁。在顯微鏡下，菌絲體通常呈細長的絲狀體，有時呈密集的孢子團。許多種霉菌的孢子在休眠階段能夠耐受極其惡劣和不宜生長的環(huán)境，當其遇到合適的生長條件時才會被激活。
6、病毒
病毒是一種微小的感染性病原體，利用宿主細胞的結(jié)構(gòu)進行繁殖。它們的體積極小，難以在培養(yǎng)中被檢測到，也難以從細胞培養(yǎng)實驗室使用的試劑中去除。由于大多數(shù)病毒對宿主有非常嚴格的要求，因此，它們通常不會對宿主以外物種的細胞培養(yǎng)物產(chǎn)生不良影響。但被病毒感染的細胞培養(yǎng)物會對實驗室人員造成嚴重的健康威脅，尤其是當實驗室培養(yǎng)的是人類或靈長類的細胞時。要檢測細胞培養(yǎng)物是否被病毒感染，可以使用電子顯微鏡觀察、用抗體組合進行免疫染色、ELISA檢測或是使用合適的病毒引物進行PCR擴增。
7、交叉污染
雖然不如微生物污染普遍，但許多細胞系與HeLa以及其他快速生長細胞系之間的廣泛交叉污染已經(jīng)是一個明確的問題，會產(chǎn)生嚴重的后果。從值得信賴的細胞庫中獲取細胞系，定期檢查細胞系的特性，并使用良好的無菌技術(shù)進行操作，這些做法都將幫助您避免交叉污染。DNA指紋圖譜分析、核型分析和細胞亞型分析可以確定細胞培養(yǎng)物中是否存在交叉污染。
8、使用抗生素
請勿在常規(guī)細胞培養(yǎng)中使用抗生素，因為抗生素的連續(xù)使用會促進耐藥菌株的生長，并導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，就會發(fā)展成大規(guī)模污染?？股氐某掷m(xù)使用還可能掩蓋支原體感染和其他隱性污染。此外，某些抗生素可能會與細胞發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾正在研究的細胞過程。抗生素只能作為對付污染的最后手段且只能短期使用，并應(yīng)盡快從培養(yǎng)物中去除。如果長期使用抗生素，則應(yīng)同時進行無抗生素培養(yǎng)，作為檢測隱性感染的對照。
你知道如何預(yù)防實驗室微生物污染嗎？
消毒是實驗室工作中最重要的措施，可以有效阻斷病毒、細菌或其他有害物質(zhì)的傳播，是維持實驗室衛(wèi)生安全的重要策略。
實驗室工作人員在進行清潔消毒時，必須選擇合適的清潔和消毒方法，以確保實驗室的衛(wèi)生安全。過氧化氫消毒法是一種有效的消毒方法，在實驗室空氣消毒，表面和容器消毒，以及新工具的消毒方面應(yīng)用較多，以有效地抑制實驗室菌落。
過氧化氫消毒是指將一定量過氧化氫（正在水中分解）和活性碳添加到實驗室，用來殺滅細菌、真菌、病毒等病原體。過氧化氫是一種化學(xué)殺菌劑，它可以通過與微生物的蛋白質(zhì)和多糖酶反應(yīng)，從而破壞微生物的結(jié)構(gòu)和功能，從而達到消毒的目的。過氧化氫消毒是有效且安全的。
首先，過氧化氫消毒能有效抑制各種微生物從而達到消毒和清潔的目的，這是一種非常有效的清潔和消毒方法，適用于實驗室清潔消毒。過氧化氫消毒有特殊的抗菌作用，可有效得抑制各種微生物，而且能有效抗擊革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌，在實驗室空氣消毒，表面和容器消毒，以及新工具的消毒方面，過氧化氫消毒的滅菌效果非常出色，能有效避免空氣中的各種有害物質(zhì)對實驗研究的影響，從而實現(xiàn)實驗室的衛(wèi)生安全保障。
此外，過氧化氫消毒對各種實驗室消毒場合都有較好的表現(xiàn)。無論是在抹布、手持工具、新研發(fā)的工具上，還是在手洗臺或洗衣服的地方，過氧化氫的均勻、完整的成分，既能清除有害的微生物，又能減少由于實驗室污染和積聚的有害物質(zhì)，使實驗室的靜電環(huán)境更平穩(wěn)，從而提高實驗的準確性和可靠性。
最后，過氧化氫消毒的劇毒性低，令人放心，毒性極低，就連體內(nèi)代謝也不存在安全隱患，不會對人體健康造成任何影響；并且過氧化氫消毒都通過了SGS認證（中國內(nèi)澇中心），是安全無害的清潔和消毒劑，可以放心使用。
總之，為了做到清潔消毒正確，保證衛(wèi)生安全，實驗室工作人員在選擇清潔消毒方法時，應(yīng)首選過氧化氫消毒。由于過氧化氫消毒的安全性，有效性，高效性和劇毒性低，既能起到清除微生物的作用，也能防止實驗室空氣污染，從而保證實驗室的安全性和衛(wèi)生安全。
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