一、背景
小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物是從小鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取的，小鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備。小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，簡(jiǎn)稱(chēng)膠質(zhì)細(xì)胞，是神經(jīng)組織中除神經(jīng)元以外的另一大類(lèi)細(xì)胞，也有突起，但無(wú)樹(shù)突和軸突之分，廣泛分布于中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)。在哺乳類(lèi)動(dòng)物中，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元的細(xì)胞數(shù)量比例約為10：1。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要有星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞(與前者合稱(chēng)為大膠質(zhì)細(xì)胞)和小膠質(zhì)細(xì)胞等。
傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細(xì)胞屬于結(jié)締組織，其作用僅是連接和支持各種神經(jīng)成分，其實(shí)神經(jīng)膠質(zhì)還起著分配營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、參與修復(fù)和吞噬的作用，在形態(tài)、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織。CD11b單克隆抗體(OX42)特異性標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞，因能識(shí)別鼠的CR3受體，CR3受體位于小膠質(zhì)細(xì)胞的分支，故OX42抗體特異性標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞。
二、應(yīng)用
小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物可用于甘草查爾酮A對(duì)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及其機(jī)制：
在正常的腦組織中,小膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)分枝狀,為靜息狀態(tài)。分枝狀的小膠質(zhì)細(xì)胞具有維持神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡和修復(fù)其損傷的功能。活化的小膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)變形蟲(chóng)樣,具有吞噬異物和分泌一些細(xì)胞因子和趨化因子的功能。過(guò)度活化的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎細(xì)胞因子類(lèi)(TNF-α、IL-6和IL-1β)和促炎酶類(lèi)(i NOS和COX-2)能夠?qū)е律窠?jīng)元死亡,死亡的神經(jīng)元又可以引發(fā)小膠質(zhì)細(xì)胞活化。
炎癥反應(yīng)的惡性循環(huán)使腦部的神經(jīng)元持續(xù)的變性與死亡,加劇著炎癥的發(fā)生發(fā)展。越來(lái)越多的研究表明小膠質(zhì)細(xì)胞活化引發(fā)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)在神經(jīng)退行性疾病如帕金森病等疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。因此,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度激活引發(fā)的炎癥能夠阻止神經(jīng)退行性疾病進(jìn)一步發(fā)展。甘草查爾酮A(Licochalcone A)為甘草中黃酮類(lèi)化合物,具有廣泛的藥理活性,包括抗炎、抗腫瘤、抗菌和抗寄生蟲(chóng)等。用MTT法確定甘草查爾酮A對(duì)BV-2細(xì)胞的最佳濃度范圍。不同濃度的甘草查爾酮A預(yù)處理BV-2細(xì)胞1h,LPS刺激4h,利用Western blot和熒光定量PCR檢測(cè)各組的i NOS和COX-2表達(dá)量的變化,以確定甘草查爾酮A的最佳濃度。
為了確定不同濃度甘草查爾酮A對(duì)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子的影響,利用熒光定量PCR檢測(cè)甘草查爾酮A預(yù)處理BV-2細(xì)胞1h,LPS刺激4h,各組的促炎細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)m RNA表達(dá)量的變化;利用ELISA檢測(cè)甘草查爾酮A預(yù)處理BV-2細(xì)胞1h,LPS刺激24h,各組的促炎細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)分泌量的變化。然后用Western blot技術(shù)檢測(cè)甘草查爾酮A對(duì)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞中MAPK信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路的影響。
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