百歐博偉生物:隨著微生物學(xué)、生物化學(xué)和分子生物化學(xué)的飛速發(fā)展,對(duì)病原微生物的鑒定己不再局限于對(duì)它的外部形態(tài)結(jié)構(gòu)及生理特性等一般檢驗(yàn)上,而是從分子生物學(xué)水平上研究生物大分子,特別是核酸結(jié)構(gòu)及其組成部分。在此基礎(chǔ)上建立的眾多檢測技術(shù)中,核酸探針和聚合酶鏈反應(yīng),以其敏感、特異、簡便、快速的特點(diǎn)成為世人矚目的生物技術(shù)革命的新產(chǎn)物,業(yè)已逐步應(yīng)用于食源性病原菌的檢測。分子生物學(xué)方法除了可用于初篩檢測,由于其具有高特異性和敏感性,因此可直接用于微生物的鑒定。
核酸探針在快速檢測食品中致病菌的研究現(xiàn)狀
原理:將己知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標(biāo)記,加入己變性的被檢DNA樣品中,在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈,從而達(dá)到鑒定樣品中DNA的目的。
核酸探針:能認(rèn)識(shí)到特異性核苷酸序列,且有標(biāo)記的單鏈DNA分子。
核酸探針的應(yīng)用主要的范圍:
(1)用于檢測無法培養(yǎng),不能用作生化鑒定、不可觀察的微生物產(chǎn)物以及缺乏診斷抗原等情況,如腸毒素基因。
(2)用于檢測同食源性感染有關(guān)的病毒病,如檢測肝炎病毒,流行病學(xué)調(diào)查研究,區(qū)分有毒和無毒菌株。
(3)檢測細(xì)菌內(nèi)抗藥基因。
(4)分析食品是否會(huì)被某些耐藥菌株污染,判定食品污染的特性。
(5)細(xì)菌分型,包括rRNA分型。
核酸探針檢測技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是:
(1)特異性;
(2)敏感性。
存在的問題:
檢測一種菌就需要制備一種探針;要達(dá)到檢測量還要對(duì)樣品進(jìn)行一定時(shí)問的培養(yǎng);探針檢測是分析基因序列,對(duì)毒素污染的食品有時(shí)因樣品中不含產(chǎn)毒菌而無法檢測。
制備核酸探針雜交技術(shù):
(1)夾心雜交法
(2)核酸置換雜交分析法
(3)浸染棒法
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