一、背景
細(xì)胞輻照培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)服務(wù)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)之一，需由經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行操作。
細(xì)胞輻照指的是用X射線，β、γ射線等電離射線來(lái)輻射細(xì)胞的過(guò)程。放射治療作為治療腫瘤的重要手段，廣泛應(yīng)用于各種腫瘤的治療，具有療效確切，副作用小等優(yōu)點(diǎn)。然而在腫瘤進(jìn)行放射治療時(shí)，射線在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，不可避免的對(duì)腫瘤周?chē)＝M織、器官也產(chǎn)生一定的損傷。
為了提高放療對(duì)腫瘤的療效，減少射線對(duì)正常組織、器官的損傷，需要尋找一些輔助腫瘤治療的藥物。細(xì)胞輻照有利于在體外摸索的輻射強(qiáng)度，也在輻射增敏劑的研究中具有重要作用。此外，細(xì)胞輻照還可應(yīng)用于細(xì)胞損傷的研究。
二、實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理
輻射會(huì)延長(zhǎng)細(xì)胞周期，誘導(dǎo)染色體畸變，從而使組織、細(xì)胞受到損傷。
三、實(shí)驗(yàn)操作流程
1、細(xì)胞培養(yǎng)
2、用指定的藥物處理細(xì)胞
3、待細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，不同劑量的射線照射細(xì)胞
4、輻照細(xì)胞的培養(yǎng)
四、應(yīng)用
用于小鼠成骨細(xì)胞受X線輻照后培養(yǎng)上清液的蛋白芯片分析研究：
通過(guò)觀察不同劑量輻照對(duì)成骨細(xì)胞增殖分化及其分泌蛋白的影響,篩選輻射損傷可能的特異性蛋白并初步探討可能涉及的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,為更好地理解輻射對(duì)骨組織的生物學(xué)作用提供參考。
方法：
1、取體外培養(yǎng)的小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1,按輻照劑量分成0 Gy組、2 Gy組、4 Gy組、8 Gy組、16 Gy組5組,使用6 MV直線加速器分別予以X線輻照,觀察輻照后細(xì)胞形態(tài)的改變,CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,輻照后7 d檢測(cè)0 Gy組、2 Gy組、4 Gy組、8 Gy組細(xì)胞內(nèi)ALP活性及采用qPCR檢測(cè)細(xì)胞OPG、OCN、Runx2、ALP的mRNA表達(dá)水平。
2、小鼠成骨細(xì)胞輻照后7 d分別收集0 Gy組、2 Gy組、4 Gy組、8 Gy組細(xì)胞上清液,采用高通量蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)分泌蛋白的表達(dá)情況,GO和KEGG pathway分析差異蛋白的生物學(xué)信息,并篩選出輻射劑量依賴(lài)性上調(diào)的差異蛋白,通過(guò)ELISA驗(yàn)證。
結(jié)果：
1、輻照后成骨細(xì)胞胞體腫大,細(xì)胞核變大,胞漿內(nèi)空泡增多,特別是核區(qū)附近出現(xiàn)黑色顆粒,貼壁能力減退,出現(xiàn)較多漂浮的細(xì)胞,隨著輻射劑量增加,上述改變愈加明顯。采用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,輻照后3 d、5 d和7 d,4個(gè)輻照組均導(dǎo)致成骨細(xì)胞增殖呈輻射劑量依賴(lài)性降低（P<0.05）。輻照后7 d,各輻照組細(xì)胞內(nèi)ALP活性均較對(duì)照組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2 Gy輻照未顯著引起成骨相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的變化;4 Gy以上輻照組較對(duì)照組OPG、Runx2和ALP基因的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而OCN基因的表達(dá)水平在4 Gy輻照時(shí)下調(diào),8 Gy輻照時(shí)顯著上調(diào)（P<0.05）。
2、成骨細(xì)胞輻照后上清液中共發(fā)現(xiàn)36個(gè)表達(dá)差異蛋白,GO及KEGG Pathway分析表明X線輻照成骨細(xì)胞后,多種炎癥細(xì)胞及免疫細(xì)胞被激活,細(xì)胞增殖、分化、遷移、趨化能力增強(qiáng),細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、細(xì)胞黏附信號(hào)、血管生成信號(hào)、TNF信號(hào)通路、JAK/STAT信號(hào)通路、ERK1和ERK2信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路等明顯富集。其中IL-22和TremL1的表達(dá)水平在3個(gè)輻射劑量下都存在差異,并且均表現(xiàn)為上調(diào)。RANTES呈輻射劑量依賴(lài)性表達(dá)上調(diào),ELISA驗(yàn)證成骨細(xì)胞輻照后RANTES表達(dá)水平顯著上調(diào)（P<0.05）。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對(duì)微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究。對(duì)我國(guó)生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對(duì)社會(huì)乃至國(guó)外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù)。
除此之外，我們還擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買(mǎi)項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！