小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞提取物的知識(shí)與應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-05-15 09:03:51
一、背景
小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞提取物是從小鼠原代胎兒真皮成纖維細(xì)胞提取的，小鼠原代胎兒真皮成纖維細(xì)胞從正常小鼠胚胎組織制備。小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞提取物可以用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞主要分布于黏膜和皮下疏松結(jié)締組織，胞質(zhì)內(nèi)富含嗜堿性顆粒，細(xì)胞表面能夠表達(dá)高親和力FcεRI，可結(jié)合游離IgE，參與I型超敏反應(yīng)。小鼠胎兒真皮成纖維均來(lái)自正常小鼠胎兒真皮組織，采用組織塊培養(yǎng)法制備而來(lái)。
小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞提取物可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。小鼠真皮成纖維細(xì)胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。
二、應(yīng)用
目的通過(guò)研究FDMSCs條件培養(yǎng)基(FDMSCs conditioned medium,F-CM)對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(Keloid fibroblasts,KFs)生物學(xué)活性的影響,探索FDMSCs相關(guān)療法治療瘢痕疙瘩的可行性。真皮成纖維細(xì)胞(Adult dermal fibroblasts,ADFs)、FDMSCs和KFs,并應(yīng)用ADFs和FDMSCs制備ADFs條件培養(yǎng)基(ADFs conditioned medium,A-CM)和F-CM。
KFs分別用空白對(duì)照培養(yǎng)基(SFM)、A-CM和F-CM培養(yǎng),培養(yǎng)48h后對(duì)各組KFs進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)分析,包括細(xì)胞形態(tài)觀察(倒置顯微鏡下)、細(xì)胞數(shù)量變化(MTT比色實(shí)驗(yàn))、細(xì)胞增殖率和凋亡率改變(BrdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和TUNEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn))、細(xì)胞共培養(yǎng)干預(yù)實(shí)驗(yàn)和條件培養(yǎng)基干預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)比、凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)變化(qPCR和Western blot)、細(xì)胞凋亡時(shí)期檢測(cè)(Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè))結(jié)果通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示相對(duì)于對(duì)照組和A-CM組,F-CM可以誘導(dǎo)KFs出現(xiàn)凋亡形態(tài),并可減少活細(xì)胞的數(shù)目。但KFs增殖率沒(méi)有明顯改變但凋亡率明顯增加,這說(shuō)明細(xì)胞數(shù)目的減少主要得益于細(xì)胞凋亡的增多。
FDMSCs與KFs共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果同培養(yǎng)基干預(yù)KFs實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有明顯區(qū)別。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明F-CM可促進(jìn)細(xì)胞促凋亡蛋白BCL-2的表達(dá)并抑制細(xì)胞抑凋亡蛋白BAX的表達(dá),導(dǎo)致BCL-2/BAX升高而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明細(xì)胞凋亡時(shí)期主要為晚期凋亡。
結(jié)論：
(1)FDMSCs可成功從早期人胎兒皮膚中提取并進(jìn)行體外培養(yǎng)、傳代,并能維持穩(wěn)定的生物學(xué)特性。
(2)F-CM干預(yù)KFs實(shí)驗(yàn)結(jié)果與細(xì)胞共培養(yǎng)干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,避免了FDMSCs直接應(yīng)用于機(jī)體的潛在風(fēng)險(xiǎn)。
(3)F-CM可以通過(guò)抑制細(xì)胞抑凋亡蛋白BCL-2的表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞促凋亡蛋白BAX的表達(dá)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
(4)F-CM所誘導(dǎo)的KFs凋亡時(shí)期主要為晚期凋亡。
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