EASYSPIN 細菌RNA快速提取試劑盒的特點與儲存及注意事項！
小楊 / 2024-07-06 09:02:22
一、概述
EASYSPIN 細菌RNA快速提取試劑盒采用獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶，然后用乙醇調(diào)節(jié)結合條件后，RNA在高鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)玻璃纖維素膜，再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從玻璃纖維素膜上洗脫。適用于快速提取細菌總RNA。
二、產(chǎn)品特點
離心吸附柱內(nèi)玻璃纖維素膜全部采用進口特制吸附膜， 柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
不使用有毒的苯酚，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
快速簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
多次過柱漂洗可確保高純度，OD260/OD280典型的比值達1.9-2.0， 基本無DNA殘留， 可用于RT-PCR，Northern-blot和各種實驗。
三、產(chǎn)品儲存
所有的溶液應該是澄清的， 如果環(huán)境溫度低時溶液可能出現(xiàn)沉淀， 此時不應該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘， 即可恢復澄清。
不合適的儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀， 影響使用效果， 因此運輸和儲存均在室溫下(15℃-25℃)進行。
避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、 pH值變化， 各溶液使用后應及時旋緊蓋子。
四、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性
本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。
五、儲存事項
1、所有的溶液應該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
2、不合適的儲存于低溫（4℃或者－20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運輸和儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行。
3、避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
六、注意事項
1、次使用前請先在漂洗液RW瓶加入指定量乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
2、所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
3、需要自備乙醇。
4、裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5、預防RNase 污染，應注意以下幾方面：
1)經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase 污染。
2)使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3)RNA 在裂解液RLT 中時不會被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4)配制溶液應使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
6、關于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA的微量殘留,本公司的EASYspin系列RNA提取產(chǎn)品，由于采取了本公司獨特的緩沖體系和選擇了特殊吸附能力的吸附膜，在大多數(shù)RT-PCR 擴增過程中極其微量的DNA殘留（一般電泳EB染色紫外燈下觀察不可見）影響不是很大, 如果要進行嚴格的mRNA表達量分析如熒光定量PCR,我們建議在進行模板和引物的選擇時：
選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA中的連接區(qū),這樣DNA就不能作為模板參與擴增反應。 選擇基因組DNA和cDNA上擴增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。 將RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I處理后的RNA清潔(cleanup)，請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。 在步驟去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上進行DNase I處理。請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
7、RNA 純度及濃度檢測：
完整性：RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳 (電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE電泳緩沖液；150v，15 分鐘)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA 為rRNA，電泳后UV 下應能看到非常明顯的rRNA 條帶。動物rRNA 大小分別約為5 kb 和2kb，分別相當于28S 和18S rRNA。動物RNA 樣品中rRNA 亮度應為次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否則表示RNA 樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴重降解。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的參考指標。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在2.1-2.2 之間（100%純的RNA比值一般是2.2左右，很多公司無法達到這個標準，所以1.9-2.0就湊合用了，但是我們的產(chǎn)品標準一般可以達到2.1-2.2）。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9 之間，但這并不表示RNA 不純。
濃度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free水將分光光度計調(diào)零，取稀釋液進行OD260, OD280 測定，按照以下公式進行RNA濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。
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