臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用及使用方法！
小楊 / 2024-07-30 09:17:23
一、背景
臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒是一種常用的細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒，利用臺(tái)盼藍(lán)染色技術(shù)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的存活狀態(tài)。臺(tái)盼藍(lán)是一種能夠透過(guò)死亡或受損細(xì)胞膜的染料，可以將死亡或受損細(xì)胞染成藍(lán)色，而活細(xì)胞則不會(huì)被染色。通過(guò)染色后的細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以計(jì)算出細(xì)胞的存活率。
1、收集細(xì)胞樣品并進(jìn)行離心，去除上清液，用適量的細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞沉淀。
將等體積的臺(tái)盼藍(lán)染色液加入細(xì)胞懸液中，充分混勻后，染色一段時(shí)間（一般為3-5分鐘）。
2、染色完成后，將細(xì)胞懸液在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或拍照后計(jì)數(shù)，記錄染成藍(lán)色的3.死亡或受損細(xì)胞數(shù)目和總細(xì)胞數(shù)目。
4、計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率=(總細(xì)胞數(shù)目-藍(lán)色細(xì)胞數(shù)目)/總細(xì)胞數(shù)目×100%。
使用該試劑盒時(shí)，只需將待測(cè)樣品加入到含有臺(tái)盼藍(lán)染料的反應(yīng)體系中，經(jīng)過(guò)一定的反應(yīng)時(shí)間后，即可通過(guò)顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀分析來(lái)判斷細(xì)胞的存活情況。
臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，適用于各種類(lèi)型的細(xì)胞存活率檢測(cè)，包括腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、干細(xì)胞等。
臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)包括操作簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確等。該試劑盒適用于各種類(lèi)型的細(xì)胞，包括貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等，常用于科研和藥物篩選等領(lǐng)域。然而，由于臺(tái)盼藍(lán)染色的原理是基于細(xì)胞膜的完整性，因此對(duì)于一些細(xì)胞膜通透性增高的細(xì)胞或某些特定情況下，可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。此時(shí)需要結(jié)合其他檢測(cè)方法進(jìn)行判斷。
三、應(yīng)用
明確H/R過(guò)程中,心肌細(xì)胞收縮功能、細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]cyt濃度以及鈣敏感性的變化并探討可能存在的機(jī)制;(二)明確H/R過(guò)程中,線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)和功能的改變情況并探究有效的保護(hù)方案;(三)明確H/R過(guò)程中,通過(guò)保護(hù)線(xiàn)粒體的結(jié)構(gòu)和功能對(duì)ERS通路激活以及心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能影響并探討可能存在的機(jī)制。
研究方法(一)原代分離成年大鼠心肌細(xì)胞H/R模型的構(gòu)建研究采用Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)分離原代的成年大鼠心肌細(xì)胞,隨機(jī)分為對(duì)照組(CTL組)和缺氧/復(fù)氧(H/R組),利用Mayo Clinic構(gòu)建的氣液混合瓶和流量控制泵系統(tǒng),動(dòng)態(tài)調(diào)控細(xì)胞培養(yǎng)皿所在腔室內(nèi)氣體和灌注液氧濃度。CTL組持續(xù)灌注37℃正常氧濃度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液;H/R組首先在低氧環(huán)境中灌注37℃低氧濃度不含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液30 min,之后在正常氧濃度環(huán)境中恢復(fù)灌注37℃正常氧濃度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液120min,用來(lái)模擬心肌細(xì)胞H/R的過(guò)程。利用IonOptix系統(tǒng)、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫熒光法、氧濃度測(cè)定探針及臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒等,對(duì)原代分離的成年大鼠心肌細(xì)胞的純度以及模型構(gòu)建可靠性等進(jìn)行研究和驗(yàn)證。
利用臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒臺(tái)盼藍(lán)染色、IonOptix系統(tǒng)、倒置相差顯微鏡、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)以及fura-2 AM熒光標(biāo)記法等,觀測(cè)存活心肌細(xì)胞的存活率以及形態(tài)學(xué)改變,同時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)候選細(xì)胞的收縮舒張功能以及細(xì)胞內(nèi)的[Ca2+]cyt濃度變化,前者包括心肌細(xì)胞肌節(jié)靜息長(zhǎng)度(sarcomere resting length,SRL)、肌節(jié)收縮長(zhǎng)度(sarcomere shortening length,SSL)、收縮速度和舒張速度等指標(biāo),后者包括[Ca2+]cyt濃度基礎(chǔ)值、峰值、鈣敏感性等指標(biāo),從而明確H/R過(guò)程中心肌細(xì)胞功能的改變。同時(shí),利用免疫熒光法,測(cè)定H/R對(duì)存活的大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)總心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)及磷酸化cTnI(p-cTnI)的表達(dá)影響,探討心肌細(xì)胞功能改變可能存在的分子生物學(xué)機(jī)制。
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