雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基的使用方法與培養(yǎng)現(xiàn)象及結(jié)果判讀！
小楊 / 2025-07-07 09:12:02
雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管是用于水中或某些食品中
糞腸球菌和
屎腸球菌（統(tǒng)稱糞鏈球菌群）推定性檢測(cè)的選擇性增菌培養(yǎng)基。其使用方法和觀察現(xiàn)象如下：
一、使用方法 (Standard Method)
1、樣品準(zhǔn)備：
水樣：根據(jù)預(yù)計(jì)污染程度，選擇合適體積的水樣（如100mL、10mL、1mL）或適當(dāng)稀釋度。
食品樣：需按標(biāo)準(zhǔn)方法（如ISO或國(guó)標(biāo)）進(jìn)行均質(zhì)、稀釋。
2、接種：
關(guān)鍵點(diǎn)：“雙料”意味著培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分濃度是單料的兩倍，因此用于接種較大體積的樣品。
用無(wú)菌吸管吸取10mL水樣（或食品樣品的10mL稀釋液）直接加入到一支雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管中。
注意：如果接種量小于10mL（如1mL），則應(yīng)使用單料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管。雙料管專門為接種10mL樣品設(shè)計(jì)。
3、培養(yǎng)：
將接種好的培養(yǎng)基管放入恒溫培養(yǎng)箱。
培養(yǎng)溫度：36 ± 1°C
培養(yǎng)時(shí)間：48 ± 2小時(shí)
4、觀察：
在培養(yǎng)結(jié)束后（通常24小時(shí)和48小時(shí)各觀察一次），取出培養(yǎng)基管。
肉眼觀察培養(yǎng)基的渾濁度變化和產(chǎn)氣情況（觀察杜氏小管）。
二、現(xiàn)象與結(jié)果判讀
1、陽(yáng)性結(jié)果 (推定陽(yáng)性 - Presumptive Positive)：
渾濁度：培養(yǎng)基出現(xiàn)明顯的渾濁（與未接種的空白管對(duì)比）。
產(chǎn)氣：杜氏小管頂端有氣泡聚集（無(wú)論大小，即使是很小的氣泡也算）。氣泡的產(chǎn)生是由于某些腸球菌能發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖類產(chǎn)氣。
判定：只要在培養(yǎng)期內(nèi)（通常是48小時(shí)）觀察到渾濁并伴有任何產(chǎn)氣現(xiàn)象，即可判定為糞鏈球菌群推定陽(yáng)性。這是初步指示樣品中可能存在目標(biāo)菌。
2、陰性結(jié)果 (推定陰性 - Presumptive Negative)：
渾濁度：培養(yǎng)基保持澄清或僅有極其輕微、不顯著的渾濁（與空白管無(wú)明顯區(qū)別）。
產(chǎn)氣：杜氏小管內(nèi)完全沒(méi)有氣泡。
判定：培養(yǎng)48小時(shí)后未觀察到渾濁和產(chǎn)氣，判定為糞鏈球菌群推定陰性。
三、重要注意事項(xiàng)
1、推定性試驗(yàn)：雙料腸球菌肉湯的陽(yáng)性結(jié)果僅表明樣品中可能存在糞鏈球菌群。它不能作為最終確認(rèn)。陽(yáng)性管必須進(jìn)行后續(xù)的確證試驗(yàn)（如轉(zhuǎn)移到膽汁七葉苷瓊脂/BEA斜面或KF鏈球菌瓊脂上培養(yǎng)，并進(jìn)行革蘭氏染色、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗(yàn)等生化鑒定）才能最終報(bào)告檢出糞腸球菌或屎腸球菌。
2、選擇性與差異性：
疊氮化鈉：是主要的選擇性抑制劑，能抑制大多數(shù)革蘭氏陰性菌和部分革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，而腸球菌對(duì)其有相對(duì)耐受性。
TTC (氯化三苯基四氮唑)：常作為指示劑加入。腸球菌生長(zhǎng)時(shí)還原TTC，使菌落或培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色或粉紅色（尤其是在確證培養(yǎng)基如BEA上更明顯）。但在肉湯管中，渾濁本身是主要指標(biāo)，顏色變化可能不如在固體培養(yǎng)基上顯著。
3、無(wú)菌操作：整個(gè)接種過(guò)程必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行，避免雜菌污染導(dǎo)致假陽(yáng)性。
4、溫度控制：嚴(yán)格控制培養(yǎng)溫度（36°C）對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性至關(guān)重要。
5、觀察時(shí)機(jī)：建議在24小時(shí)和48小時(shí)分別觀察記錄一次。有些陽(yáng)性可能在24小時(shí)就顯現(xiàn)，有些則要到48小時(shí)。最終判讀以48小時(shí)結(jié)果為準(zhǔn)。
6、標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：具體操作步驟（如接種量、培養(yǎng)時(shí)間、確證方法）應(yīng)嚴(yán)格遵循你所執(zhí)行的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（如《GB/T 8538-2022 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》、《GB 4789.6 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》中相關(guān)的腸球菌檢測(cè)部分，或ISO 7899-2等國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)）。
四、總結(jié)：
用法：接種 10mL 樣品液到雙料腸球菌肉湯管中，36°C 培養(yǎng)48小時(shí)。
陽(yáng)性現(xiàn)象：渾濁 + 杜氏小管內(nèi)有氣泡（推定存在糞鏈球菌群）。
陰性現(xiàn)象：澄清/輕微渾濁（無(wú)顯著變化） + 杜氏小管內(nèi)無(wú)氣泡（推定無(wú)糞鏈球菌群）。
關(guān)鍵下一步：所有陽(yáng)性管必須進(jìn)行確證試驗(yàn)才能報(bào)告最終結(jié)果。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇耍本┌贇W博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基從紅色變?yōu)辄S色現(xiàn)象的原因分析！
下一篇：腸道巴氏桿菌的生物學(xué)特性與致病性及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與預(yù)防！