綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的滅菌與保存方法及適合培養(yǎng)的微生物!
小楊 / 2025-11-05 09:25:09
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的保存方法
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的保存核心是“無菌密封 + 適宜溫濕度”,分未接種(空白培養(yǎng)基)和已接種(含菌種)兩種場(chǎng)景,具體方法如下:
1、空白培養(yǎng)基(未接種)保存
保存條件:密封后置于 4℃冰箱冷藏,避免冷凍(防止瓊脂破裂)。
密封要求:試管斜面需用石蠟或無菌膠塞密封管口,培養(yǎng)皿需用膜纏繞邊緣,隔絕空氣和雜菌。
保存期限:冷藏可保存 1-2 個(gè)月,期間需定期檢查,若出現(xiàn)渾濁、霉點(diǎn)或凝固狀態(tài)異常,需丟棄。
注意事項(xiàng):使用前需提前取出,恢復(fù)至室溫后再接種,避免溫差導(dǎo)致培養(yǎng)基表面凝結(jié)水珠。
2、已接種培養(yǎng)基(含菌種)保存
短期保存(1-3 個(gè)月):4℃冰箱冷藏,密封方式同空白培養(yǎng)基,適用于臨時(shí)使用的菌種。
中期保存(3-6 個(gè)月):斜面菌種密封后冷藏,每 3 個(gè)月轉(zhuǎn)接一次新培養(yǎng)基,維持菌種活性。
長(zhǎng)期保存(配合其他方法):僅靠該培養(yǎng)基難以長(zhǎng)期保存,需結(jié)合砂土管法、冷凍干燥法等,或定期轉(zhuǎn)接更新。
注意事項(xiàng):避免反復(fù)溫差變化,冷藏時(shí)遠(yuǎn)離冰箱門(減少溫度波動(dòng)),保存期間禁止打開密封裝置。
3、通用保存關(guān)鍵要點(diǎn)
環(huán)境要求:保存環(huán)境需干燥、清潔,避免與腐蝕性物質(zhì)或雜菌污染源共存。
檢查頻率:每周觀察一次,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基霉變、漏液或菌種異常,及時(shí)處理。
廢棄處理:過期或污染的培養(yǎng)基,需高壓滅菌(121℃,15 分鐘)后再丟棄,避免污染環(huán)境。
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的滅菌方法
1、核心滅菌方法:高壓蒸汽滅菌法(首選)
這是最常用且效果最可靠的方式,能徹底殺滅培養(yǎng)基中的細(xì)菌、真菌孢子等微生物。
操作步驟:將分裝完成的培養(yǎng)基(試管/三角瓶)放入高壓滅菌鍋,加水至指定水位,密封滅菌鍋。
滅菌參數(shù):溫度 121℃、壓力 0.1MPa,維持 15-20 分鐘(體積大于 500mL 時(shí)可延長(zhǎng)至 25-30 分鐘)。
關(guān)鍵注意:滅菌結(jié)束后需自然降壓至常壓,避免快速放氣導(dǎo)致培養(yǎng)基暴沸或瓊脂凝固異常;取出后及時(shí)冷卻,減少雜菌污染風(fēng)險(xiǎn)。
2、輔助滅菌方法(適配特殊場(chǎng)景)
煮沸滅菌法(應(yīng)急備用)
適用情況:無高壓滅菌設(shè)備時(shí),臨時(shí)處理少量培養(yǎng)基。
操作:將培養(yǎng)基放入鍋中,煮沸后維持 30-60 分鐘,可殺滅多數(shù)營(yíng)養(yǎng)體,但無法徹底去除芽孢,僅適用于非嚴(yán)格無菌要求的培養(yǎng)。
間歇滅菌法(無高壓設(shè)備時(shí)的替代方案)
操作邏輯:分三次煮沸滅菌,每次煮沸 30 分鐘,間隔 24 小時(shí),利用芽孢萌發(fā)為營(yíng)養(yǎng)體后再滅菌的原理,實(shí)現(xiàn)徹底殺菌。
注意:每次滅菌后需置于 37℃環(huán)境培養(yǎng) 24 小時(shí),讓芽孢萌發(fā),再進(jìn)行下一次滅菌,操作較繁瑣。
3、滅菌前準(zhǔn)備與后續(xù)檢查
滅菌前:分裝時(shí)避免培養(yǎng)基沾污管口/瓶口,密封不宜過緊(留少量透氣空間,防止滅菌時(shí)容器破裂)。
滅菌后:冷卻凝固后檢查,若培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、霉點(diǎn)或異味,說明滅菌不徹底,需重新制備。
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基適合培養(yǎng)的微生物
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基主要適合培養(yǎng)真菌類微生物,尤其適配以分解利用復(fù)雜有機(jī)物為營(yíng)養(yǎng)方式的真菌。
1、核心適配微生物類別
常見腐生真菌:如
青霉、
曲霉、
根霉、
毛霉等,能利用培養(yǎng)基中的淀粉、碳水化合物快速生長(zhǎng)。
部分植物病原真菌:例如引起植物病害的
鐮刀菌、
炭疽菌等,可用于病害診斷和菌種培養(yǎng)。
其他異養(yǎng)真菌:多數(shù)不依賴特殊營(yíng)養(yǎng)的真菌,均可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng),適用范圍廣泛。
2、不適配的微生物
細(xì)菌:培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分和 pH 值(6.0±0.2)更適配真菌,細(xì)菌多偏好中性或微堿性環(huán)境,且部分細(xì)菌需特定營(yíng)養(yǎng)因子,該培養(yǎng)基無法滿足。
放線菌:需高碳氮比、偏堿性的培養(yǎng)基,與綜合馬鈴薯培養(yǎng)基的理化性質(zhì)不符。
自養(yǎng)型微生物:無法利用培養(yǎng)基中的有機(jī)碳源,需依賴無機(jī)碳合成有機(jī)物,不適用于此培養(yǎng)基。
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