如何判斷MLGA瓊脂培養(yǎng)基是否適合金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)？
小楊 / 2025-11-14 09:36:06
MLGA瓊脂培養(yǎng)基是否適合
金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，核心是通過(guò)空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證培養(yǎng)基的選擇性和鑒別有效性，結(jié)合
金黃色葡萄球菌的特征生長(zhǎng)現(xiàn)象綜合判斷，具體可按以下步驟操作，同時(shí)兼顧實(shí)驗(yàn)室實(shí)操的可執(zhí)行性：
一、核心判斷邏輯
MLGA培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)目的是“抑制雜菌 + 支持金黃色葡萄球菌生長(zhǎng) + 通過(guò)生化反應(yīng)鑒別”，因此判斷標(biāo)準(zhǔn)需滿足 3 點(diǎn)：
培養(yǎng)基自身無(wú)雜菌污染（空白對(duì)照合格）；
金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株能正常生長(zhǎng)且出現(xiàn)典型特征（陽(yáng)性對(duì)照合格）；
雜菌被有效抑制（選擇性合格）。
二、具體操作步驟（實(shí)驗(yàn)室實(shí)操版）
1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料
待檢測(cè)的 MLGA 瓊脂平板（已滅菌凝固，無(wú)裂縫、無(wú)雜菌菌落）；
金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（如
ATCC 25923，實(shí)驗(yàn)室常用質(zhì)控菌株）；
無(wú)菌生理鹽水、接種環(huán)、酒精燈、36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱。
2、接種與培養(yǎng)
空白對(duì)照：取 1 塊未接種任何菌的 MLGA 平板，與接種后的平板同條件培養(yǎng) 18-24 小時(shí)，用于判斷培養(yǎng)基是否滅菌合格、是否污染。
陽(yáng)性對(duì)照：將金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株用無(wú)菌生理鹽水稀釋至 10? CFU/mL，取 0.1mL 涂布于 MLGA 平板（或用接種環(huán)劃線接種），36℃±1℃有氧培養(yǎng) 18-24 小時(shí)。
雜菌對(duì)照：分別將大腸桿菌、表皮葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株按上述方法接種至另外 2 塊 MLGA 平板，同條件培養(yǎng)，驗(yàn)證培養(yǎng)基的選擇性。
3、結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)（關(guān)鍵指標(biāo)）
檢測(cè)對(duì)象 合格表現(xiàn)（適合
金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)） 不合格表現(xiàn)（不適合）
空白對(duì)照平板 無(wú)任何菌落生長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色均勻（紅色），無(wú)渾濁、沉淀或變色圈 出現(xiàn)雜菌菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底或污染
金黃色葡萄球菌陽(yáng)性平板 ①菌落形態(tài)：直徑 1-2mm，圓形、凸起、表面光滑、質(zhì)地黏稠，顏色為金黃色/檸檬黃色；②生化特征：菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁沉淀環(huán)，沉淀環(huán)外圍伴隨黃色變色圈（產(chǎn)酸使酚紅變色）；③生長(zhǎng)狀態(tài)：菌落密集度正常，無(wú)抑制性生長(zhǎng) ①無(wú)菌落生長(zhǎng)或菌落極少；②菌落形態(tài)異常；③無(wú)沉淀環(huán)或變色圈
雜菌對(duì)照平板 ①大腸桿菌：幾乎不生長(zhǎng)，或僅出現(xiàn)微小、透明的異常菌落；②表皮葡萄球菌：少量生長(zhǎng)但無(wú)乳白色沉淀環(huán)，菌落顏色為白色/淡粉色 大腸桿菌大量生長(zhǎng)（菌落濕潤(rùn)、紅色，有異味），或表皮葡萄球菌出現(xiàn)沉淀環(huán)
三、實(shí)操注意事項(xiàng)（避免誤判）
培養(yǎng)時(shí)間嚴(yán)格控制：必須在 18-24 小時(shí)觀察結(jié)果，超過(guò) 24 小時(shí)后雜菌可能緩慢生長(zhǎng)，或金黃色葡萄球菌的沉淀環(huán)/變色圈擴(kuò)散過(guò)大，干擾判斷；若培養(yǎng)不足 16 小時(shí)，可能因反應(yīng)不完全未出現(xiàn)沉淀環(huán)。
標(biāo)準(zhǔn)菌株的使用：需用活性良好的金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（如
ATCC 25923），接種前需復(fù)蘇（接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng) 8 小時(shí)），避免因菌株失活導(dǎo)致“假陰性”（誤判培養(yǎng)基不適合）。
培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件：MLGA 培養(yǎng)基需密封冷藏（4℃±2℃），保質(zhì)期通常為 1-2 周，若培養(yǎng)基出現(xiàn)干裂、顏色變深（酚紅過(guò)度酸化）、卵黃層分層變質(zhì)，需直接丟棄，無(wú)需檢測(cè)。
重復(fù)驗(yàn)證：若首次檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照生長(zhǎng)異常，需更換新批次培養(yǎng)基重復(fù)實(shí)驗(yàn)，排除單次操作誤差。
四、總結(jié)
空白對(duì)照無(wú)雜菌污染；
金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株生長(zhǎng)良好，出現(xiàn)“金黃色/檸檬黃色黏稠菌落 + 乳白色沉淀環(huán) + 黃色變色圈”的典型特征；
大腸桿菌等雜菌被有效抑制，無(wú)大量生長(zhǎng)。
反之，若陽(yáng)性對(duì)照生長(zhǎng)異常或雜菌過(guò)度生長(zhǎng)，則說(shuō)明培養(yǎng)基選擇性或鑒別性失效，不適合用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)。
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