乳糖肉湯培養(yǎng)基的原理和使用方法及常見問題與解決！
小楊 / 2025-11-20 09:34:27
乳糖肉湯培養(yǎng)基是用于檢測腸道菌群（如
大腸菌群）的液體增菌培養(yǎng)基，核心原理是利用乳糖發(fā)酵特性篩選目標菌，使用需遵循配制、接種、培養(yǎng)、觀察的標準化流程。
一、核心原理
營養(yǎng)供給：蛋白胨、牛肉膏提供細菌生長所需的氮源、維生素和礦物質(zhì)，滿足基礎(chǔ)代謝需求。
選擇性篩選：乳糖作為唯一碳源，腸道致病菌（如
大腸菌群）可發(fā)酵乳糖產(chǎn)生酸和氣體，非目標菌多無法利用乳糖。
酸堿指示：培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫，發(fā)酵產(chǎn)酸會使培養(yǎng)基 pH 下降，顏色由紫色變?yōu)辄S色，同時氣體可在發(fā)酵管中形成氣泡，直觀判斷目標菌存在。
二、使用方法
培養(yǎng)基配制：按配方比例稱取乳糖、蛋白胨、牛肉膏、溴甲酚紫等成分，加入蒸餾水加熱溶解，調(diào)整 pH 至 7.2-7.4，分裝到帶發(fā)酵管的試管中。
滅菌處理：將分裝后的試管置于高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃滅菌 15-20 分鐘，冷卻后備用（確保發(fā)酵管內(nèi)無氣泡）。
樣品接種：無菌操作下，取適量樣品（如食品勻液、水樣）接種到培養(yǎng)基中，振蕩混勻。
培養(yǎng)觀察：將接種后的試管放入 36±1℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 24-48 小時，觀察培養(yǎng)基顏色和發(fā)酵管氣泡。
結(jié)果判斷：若培養(yǎng)基變黃且發(fā)酵管有氣泡，為陽性（可能存在目標菌）；顏色不變或無氣泡，為陰性。
三、乳糖肉湯培養(yǎng)基的常見問題
乳糖肉湯培養(yǎng)基的常見問題集中在配制、滅菌、培養(yǎng)和結(jié)果判斷環(huán)節(jié)，核心影響因素是成分比例、pH 值、滅菌條件和操作規(guī)范性。
1、配制環(huán)節(jié)常見問題
成分溶解不徹底：乳糖或蛋白胨未完全溶解，會導致培養(yǎng)基營養(yǎng)分布不均，影響細菌生長。
pH 值偏差：未調(diào)整至 7.2-7.4，過酸或過堿會抑制目標菌繁殖，還可能導致指示劑顏色異常。
指示劑添加過量/不足：溴甲酚紫過多會掩蓋發(fā)酵產(chǎn)酸的顏色變化，過少則無法清晰觀察變色。
2、滅菌與儲存問題
滅菌不徹底：溫度未達 121℃或時間不足，會殘留雜菌，導致培養(yǎng)后出現(xiàn)假陽性。
滅菌后發(fā)酵管有氣泡：冷卻過程中空氣進入發(fā)酵管，會干擾后續(xù)氣體產(chǎn)生的判斷。
儲存不當：培養(yǎng)基冷藏過久或反復凍融，會導致營養(yǎng)成分降解，甚至指示劑失效。
3、接種與培養(yǎng)問題
無菌操作不規(guī)范：接種過程中引入外界雜菌，造成污染，出現(xiàn)無關(guān)變色或產(chǎn)氣。
接種量不當：樣品接種過多易導致營養(yǎng)耗盡，過少則目標菌濃度不足，無法形成陽性結(jié)果。
培養(yǎng)溫度/時間偏差：溫度高于 37℃或低于 35℃，會抑制腸道菌群生長；培養(yǎng)時間不足 24 小時，可能未完成發(fā)酵反應。
4、結(jié)果判斷異常問題
假陽性：非目標菌污染或培養(yǎng)基自身產(chǎn)酸，導致變黃但無目標菌。
假陰性：pH 過高、乳糖含量不足，或目標菌被抑制劑抑制，導致未變色無產(chǎn)氣但實際有目標菌。
顏色變化不明顯：指示劑添加不當、產(chǎn)酸量少，或培養(yǎng)基渾濁掩蓋顏色，難以判斷結(jié)果。
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