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質(zhì)粒和載體的區(qū)分
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-06-08 08:31:20

  什么是質(zhì)粒

  質(zhì)粒(Plasmid)是附加到細(xì)胞中的非細(xì)胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復(fù)制的較小的DNA分子(即細(xì)胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構(gòu)型,它存在于許多細(xì)菌以及酵母菌等生物(多為原核生物)中,乃至于植物的線粒體等胞器中。

  什么是載體

  載體即要把一個有用的基因(目的基因——研究或應(yīng)用基因)通過基因工程手段送到生物細(xì)胞(受體細(xì)胞),需要運(yùn)載工具(交通工具)攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞,這種運(yùn)載工具就叫做載體(vector)。細(xì)菌或病毒質(zhì)粒是重組DNA技術(shù)中常用的載體。

  載體的分類

  按功能分成:

 ?。?)克隆載體都有一個松弛的復(fù)制子,能帶動外源基因,在宿主細(xì)胞中復(fù)制擴(kuò)增。它是用來克隆和擴(kuò)增DNA片段(基因)的載體。

 ?。?)表達(dá)載體具有克隆載體的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)還具有轉(zhuǎn)錄/翻譯所必需的DNA順序的載體。

  按進(jìn)入受體細(xì)胞類型分:

 ?。?)原核載體

 ?。?)真核載體

 ?。?)穿梭載體(sbuttlevector)

  載體的特點(diǎn)

 ?。?)都能獨(dú)立自主的復(fù)制:載體DNA分子中有一段不影響它們擴(kuò)增的非必需區(qū)域,如MCS,插在其中的外源DNA片段,能被動的跟著載體一起復(fù)制/擴(kuò)增,就像載體的正常成分一樣。

  (2)都能便利的加以檢測:如載體的藥物抗性基因,多是抗生素抗性基因,將受體細(xì)胞放在含有該抗生素培養(yǎng)板上培養(yǎng)生長時,只有攜帶這些抗性基因的載體分子的受體細(xì)胞才能存活。

 ?。?)都能容易進(jìn)入宿主細(xì)胞中去,也易從宿主細(xì)胞中分離純化出來。

  質(zhì)??梢哉f是一個統(tǒng)稱,載體是質(zhì)粒改造過用來運(yùn)載的工具?。?

  選用質(zhì)粒做載體的要求

  以最常用的為例

 ?。?)選分子量小的質(zhì)粒,即小載體(1-1.5kb)→不易損壞,在細(xì)菌里面拷貝數(shù)也多(也有大載體);

 ?。?)一般使用松弛型質(zhì)粒在細(xì)菌里擴(kuò)增不受約束,一般10個以上的拷貝,而嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒<10個。

 ?。?)必需具備一個以上的酶切位點(diǎn),有選擇的余地;

 ?。?)必需有易檢測的標(biāo)記,多是抗生素的抗性基因,不特指多位Ampr。

  無論選用哪種載體,首先都要獲得載體分子,然后采用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑤d體DNA進(jìn)行切割,獲得分子,以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。


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