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工業(yè)生產(chǎn)過程中噬菌體污染防治研究進展
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-11-24 10:02:10

        中國微生物菌種查詢網(wǎng) 在微生物發(fā)酵生產(chǎn)過程中,由于噬菌體對微生物的侵染和裂解作用,噬菌體污染成為工業(yè)生產(chǎn)的一大難題,不僅造成生產(chǎn)周期延長,底物代謝速率降低和產(chǎn)物形成減慢,嚴重者將導(dǎo)致發(fā)酵中止或生產(chǎn)失敗,給企業(yè)帶來難以挽回的經(jīng)濟損失。
        自2014年起,國家微生物針對發(fā)酵法生產(chǎn)L-天冬氨酸過程中噬菌體污染進行防治研究,研究成果《Characterization, genome sequence, and analysis of Escherichia phage CICC 80001, a bacteriophage infecting an efficient L-aspartic acid producing Escherichia coli》發(fā)表于SCI期刊《Food Environ Virol》(IF:2.357),并申報中國發(fā)明專利1項“一株噬菌體抗性L-天冬氨酸轉(zhuǎn)化菌及其應(yīng)用(ZL201510324836.1)”。
        此項研究通過對噬菌體污染樣品中分離的1株噬菌體,進行形態(tài)觀察、全基因組測序、系統(tǒng)發(fā)育分析,將其鑒定為短尾噬菌體科自復(fù)制短尾噬菌體亞科T7樣噬菌體屬的噬菌體,編號 80001。經(jīng)檢測該噬菌體最佳侵染復(fù)數(shù)為0.1,潛伏期10 min,裂解期20 min,經(jīng)過一輪裂解周期,平均可產(chǎn)生198個子代噬菌體。通過全基因組注釋分析,發(fā)現(xiàn)該噬菌體基因組共攜帶49個蛋白編碼基因,其中32個蛋白的功能已知。通過系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)噬菌體裂解宿主的3個關(guān)鍵蛋白,其中1個屬于II型穴蛋白,可在細菌細胞膜上形成小孔洞,使細胞膜去極化,另外2個關(guān)鍵蛋白可以分別水解細菌細胞壁的N-乙酰胞壁酸與L-丙氨酸之間的酰胺鍵、以及二氨基庚二酸與D-丙氨酸之間的酰胺鍵。
        在此研究基礎(chǔ)上,本中心通過對L-天冬氨酸生產(chǎn)菌種進行誘變和抗噬菌體菌種篩選,成功選育1株噬菌體抗性菌種(大腸埃希氏菌 Escherichai coli 11021S),其L-天冬氨酸酶活力穩(wěn)定,表現(xiàn)出較好的工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用潛力,解決了發(fā)酵法生產(chǎn)L-天冬氨酸過程中噬菌體污染的難題。
        該項成果填補了國內(nèi)外L-天冬氨酸工業(yè)生產(chǎn)中噬菌體污染防治研究的技術(shù)空白。根據(jù)市場對噬菌體研究的需求, 推出噬菌體一站式技術(shù)服務(wù),主要包括:1. 噬菌體分離純化;2. 噬菌體形態(tài)學(xué)分析;3. 噬菌體最佳侵染復(fù)數(shù)研究;4. 噬菌體一步生長曲線;5. 噬菌體pH穩(wěn)定性分析;6. 噬菌體溫度耐受性研究;7. 噬菌體基因組提取;8. 噬菌體基因組測序、注釋和生物信息學(xué)分析;9. 噬菌體宿主譜研究;10. 噬菌體抗性菌種選育;11. 國外菌種保藏中心各類噬菌體代購服務(wù)。

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