瓷珠菌種保存管原理及其相關(guān)解答瓷珠菌種保存管是實(shí)驗(yàn)室保存菌種的容器，管內(nèi)有12顆表面凹孔小瓷珠用于細(xì)菌的吸附和保存，可在保存周期內(nèi)使用12次（每次1個）。
菌種保存管使用過程中，將細(xì)菌接種在菌種保存管內(nèi)，放置于-20℃或-80℃環(huán)境中可長期保存（視不同菌種與保存溫度，一般可保存3-10年）,同時菌種保存管的取用和保存較為便利（取用復(fù)蘇及保存菌株僅需1分鐘）由于菌種保存管取用和保存便利，不僅可保存一般細(xì)菌，苛刻菌，以及霉菌、酵母菌等真菌也可在低溫條件下通過菌種保存管保存，因此菌種保存管被廣泛應(yīng)用于臨床領(lǐng)域（臨床藥敏試驗(yàn)菌株的保存）、疾控領(lǐng)域（監(jiān)測分離到的菌株的保存）、菌種保存中心（菌株的日常取用與保存）以及制藥企業(yè)（陽性對照菌株保存和取用）等領(lǐng)域。
產(chǎn)品原理細(xì)菌在適宜其生長的環(huán)境中（培養(yǎng)環(huán)境:需氧、厭氧、微需氧,培養(yǎng)溫度:35℃或25℃），會在極短時間內(nèi)（8-18小時）經(jīng)歷由調(diào)整期-對數(shù)期-穩(wěn)定期-衰退期)四個生長周期(真菌需要培養(yǎng)7天、酵母菌需要培養(yǎng)三天產(chǎn)生孢子后保存，具體情況需看對數(shù)期的時間確定)。
菌種保存的最終目的，是能夠在以后的時間使用該菌種。要達(dá)到這個目的，一般同時結(jié)合以下的三方面的措施：
1.取生命力最旺盛的對數(shù)期階段的菌種，該階段菌種生命力最為頑強(qiáng)，能夠更好的耐受保存過程中溫度的變化。
2.通過降低溫度，使細(xì)菌其進(jìn)入“休眠狀態(tài)”，保存過程中該菌種處于最低的代謝活動。
3.降低細(xì)菌在降溫“休眠過程”和升溫“復(fù)蘇過程”中，溫度變化對菌種的傷害。
海博生物菌種保存管的保存原理，為目前較多實(shí)驗(yàn)室所常用的甘油保存法的改進(jìn)方法，可以簡述為“甘油小瓷珠保存法”。產(chǎn)品保存時，將菌種刮取或轉(zhuǎn)移至菌種保存管中，上下顛倒保存管，重力作用下，菌種均勻分布于凍存保護(hù)液中。將凍存管中的全部凍存液吸取出菌種保存管。密布凹孔的小瓷珠，擴(kuò)大了小瓷珠的表面張力，在表面張力作用下，每個小瓷珠的表面僅僅覆蓋著一層凍存保護(hù)液，而菌種則存在于這層保護(hù)液之中。
產(chǎn)品使用時，從-20/-40/-80冰箱中拿出菌種存管，輕輕晃動。由于此時的保存管內(nèi)已沒有聚集的液體，瓷珠在低溫下也會很容易相互分離，而不必像傳統(tǒng)甘油法保存時需要很長的甘油融化時間。隨后，用接種針任取一瓷珠，就可直接在平板上劃線接種或置于增菌液中培養(yǎng)。接種完成后，立即將該菌種保存管置于原有的保存環(huán)境中，由于此種方法能夠快速的取用菌株，因此，菌種保存管內(nèi)部溫度的波動相當(dāng)?shù)男?。因此，能夠極大避免保存溫度的大幅波動對的菌種的傷害。
注意事項(xiàng):1、被保存的菌種要求是經(jīng)過純化后培養(yǎng)18-24h內(nèi)的新鮮菌種（細(xì)菌18-24h，酵母菌需3天，形成孢子的微生物保存孢子，而放線菌和絲狀真菌需培養(yǎng)7天后保存），不宜使用老化或未經(jīng)鑒定的菌種。
2、做厭氧菌保存時，應(yīng)提供厭氧的環(huán)境，如厭氧箱、厭氧袋，菌種保存管中可通入氮?dú)鈦眚?qū)除保存菌種時所引入的氧氣。菌種復(fù)蘇時，也要創(chuàng)造厭氧的環(huán)境。
3、菌種復(fù)蘇完成后，對使用菌株需要進(jìn)行再次純化，以保證菌株的單一性。
4、菌種保存濃度必須要做3-4麥?zhǔn)媳葷岫?，如接種濃度過低將會降低復(fù)蘇效果。
5、待保存于菌種保存管中的菌種完全乳化均勻吸附在多孔小瓷珠后，要將多余的菌種保存液吸取出來并棄之，否則在復(fù)蘇時的凍融過程中會損傷菌株活性。
用戶問答：1、為什么說明書上說可在常溫下保存一年，資料又說可以長期保存？答：菌種保存管未使用前，可在常溫下保存1年，使用后，低溫保存，使微生物活性保持到最低代謝活動狀態(tài)，在-20℃可保存1-3年，-80℃或液氮保存可保存5-10年。不同菌種及不同的保存溫度保存時間會有所不同。（例如：大腸、沙門等常規(guī)細(xì)菌-20℃我們目前可以保存到6年）
2、菌種保存管能保存霉菌及酵母菌嗎？答：可以。對于霉菌等真菌需培養(yǎng)7天進(jìn)行保存,而酵母菌需培養(yǎng)三天將孢子洗脫下來進(jìn)行保存,保存管中的小瓷珠可以作為介質(zhì)來吸附孢子和菌絲,相當(dāng)于砂土保存法中砂土做為載體起到的作用。
3、所有的菌都能保存嗎？如果不是的話，什么樣的菌可以保存？什么樣的菌不可以保存？答：可以。菌種保存的原理是DNA復(fù)制時自發(fā)突變導(dǎo)致菌種退化，因此要創(chuàng)造代謝不活潑的狀態(tài),而菌種保存時使菌種進(jìn)入休眠態(tài)（孢子、芽孢),并創(chuàng)造干燥、低溫、缺氧、缺營養(yǎng)的環(huán)境,創(chuàng)造的環(huán)境越接近此狀態(tài),所保存的菌種的時間就越長,所以從原理上講,所有菌種都可用這種方法保存,但需要注意的是,由于苛刻菌（如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌）等特殊細(xì)菌保存時，需-80℃或更低溫度保存,才可以做到更長期的保存。
4、我能用菌種保存管永久保存菌株嗎？答：溫度越低，保藏效果越好。從目前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)際保存效果來看,-20℃可保存1-5年，-80℃或液氮中可保存5-10年，但需要注意的是所保存的菌種需每年抽檢進(jìn)行生化特征的鑒定,確定菌株無變異。
5、為什么在使用時要將管內(nèi)的液體盡可能多的吸出？答：吸出液體可避免反復(fù)凍融形成的冰晶對菌株的損傷，加快復(fù)蘇的過程,因此，要盡可能的將與菌種混勻后的保存液吸凈.而常用的甘油法,在復(fù)蘇的過程中需用水浴鍋快速溶解,在此過程中,對菌株傷害較大。
6、為什么在菌種保存時，要上下顛倒？為什么不能旋搖？答：上下顛倒，可使菌懸液充分混勻，菌株充分、均勻地吸附到小瓷珠上，旋搖不利于菌懸液充分混勻,反而會使菌株全部沉淀于管底。
7、菌種保存管在使用前需要放置冰箱嗎？答：本公司菌種保存管采用特殊生產(chǎn)工藝,并對產(chǎn)品進(jìn)行長期留樣觀察,以及穩(wěn)定性試驗(yàn),在使用前可以室溫存放1年，因此在發(fā)貨過程等過程中室溫放置不會影響產(chǎn)品效果。
8、將菌株反復(fù)凍存，到底對菌株有什么影響？答：低溫會使菌株細(xì)胞內(nèi)的水分形成冰晶，從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的損傷。細(xì)胞體積大者一般要比較小者對低溫更為敏感，而無細(xì)胞壁者則比有細(xì)胞壁者敏感。如果放到低溫（不是一般冰箱）進(jìn)行冷凍時，會產(chǎn)生冰晶，冰晶呈針狀，極易導(dǎo)致細(xì)菌的嚴(yán)重?fù)p傷。用電鏡觀察，可見細(xì)菌的核膜上有大量針尖樣小孔，當(dāng)從低溫下移出并開始升溫時，冰晶又會變大，故反復(fù)凍存，會對菌株造成極大損傷。
9、在使用后，菌種保存管的保存環(huán)境？需要-80℃冰箱嗎？答：本公司菌種保存管采用的是低溫冷凍保存法，因此，使用后，需放置低溫環(huán)境，如-20℃、-80℃或液氮中保存，而且溫度越低，保存效果越好。用戶需根據(jù)菌種的保存要求選擇具體保存溫度。
10、為什么在取用菌株時，操作過程要求快速？答：菌種保存復(fù)蘇的原則,要求慢凍快融,之所以要求快速,是因?yàn)樵诰N復(fù)蘇的過程中,長時間的溶解過程會對所保存的菌種造成損傷,而YOCON經(jīng)過改良的保存方法最大程度的避免復(fù)蘇所造成的影響,但我們還是建議遵循菌種的保存復(fù)蘇原則,保證所復(fù)蘇菌種的復(fù)蘇率。
11、為什么有時候菌種的保存效果不佳？答：1、可能是由于保存后未將保存液吸盡，反復(fù)凍融形成冰晶損傷菌株細(xì)胞，影響了菌株活性。2、確定所保存的菌種是否為對數(shù)生長期的菌種，我們建議普通菌種保存為18小時內(nèi)的新鮮菌種，而霉菌和酵母菌需要保存其對數(shù)生長期階段的菌種。
12、菌種保藏時為什么要進(jìn)行分離純化？答：分離純化后才能獲得單一菌株，單一菌株進(jìn)行菌種保藏才有意義，防止菌種交叉污染和變異，這也是菌種保存的基本原則。
13、該產(chǎn)品能否用于菌種的運(yùn)送，如果可以在什么條件下運(yùn)送？答：就目前試驗(yàn)數(shù)據(jù)而言，我們只建議用于普通細(xì)菌的短期運(yùn)送，對于苛刻菌及厭氧菌不能用此方法，并且在運(yùn)送期間保存液不得吸出，2-8℃運(yùn)送不超過5天，運(yùn)送到客戶手中，需重新純化。另外需要說明的是如弧菌屬的菌種需要常溫運(yùn)送,其對2-8℃溫度及其敏感。
14、菌種保存管對于平板來說，對挑選菌落個數(shù)有要求嗎？還是將整個平板的菌落全部刮入管中？答：對于要保存的細(xì)菌一般是要進(jìn)行2-3次的純化，要保證一個平板上的菌是由單一菌落傳代而來的，所以在細(xì)菌保存的過程中，為了保證制備的菌懸液可以達(dá)到3-4MCF，是可以將整個平板的的細(xì)菌全部刮到管中的，如果平板長的比較滿一般半個平板就夠用,具體用量也根據(jù)菌種的不同有所差異,如霉菌、酵母菌在保存時，不適合用濁度法。
15、對于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌，是否也可以用咱們的菌種保存管？如果可以的話，怎么操作？答：是可以用的，如果液體培養(yǎng)基能保證是純菌的話，可以直接離心，棄掉上清，然后把保存管中液體吸進(jìn)去充分混勻，然后再轉(zhuǎn)移到菌種保存管中，整個過程要注意無菌操作。不過，一般菌種保存管最好選擇平板菌落進(jìn)行保存，因?yàn)橐后w培養(yǎng)基中有雜菌是不易觀察出來的。
16、為什么我保存在平板上的菌每隔一段時間就得重新傳一次，即使是放在溫度為2-8度的冰箱中？答：在2-8℃保存的菌種,并不是出于低代謝率的環(huán)境,所以此環(huán)境下保存的菌種極易變異,故一般一個月重新傳代一次,確定菌種有無變異,并且連續(xù)傳5代后的菌種不能使用。
17、為什么說，如果有條件的話，菌種保存管最好置于-80冰箱或液氮中？答：因?yàn)?，貯存在-70℃以下低溫中能減少冰晶形成，可極大降低冰晶形成對細(xì)菌的傷害，同時可為被保存的菌種創(chuàng)造更低的代謝環(huán)境，從而延長細(xì)菌保存的時間。
出自中國微生物菌種查詢網(wǎng)