一、分類
假單胞菌屬歸于假單胞菌科，有200余種細(xì)菌，其DNA的G+C的摩爾分?jǐn)?shù)為58％～71％，主要包括銅綠假單胞菌（P.aeruginosa) ,熒光假單胞菌（P.fluorescens)、惡臭假單胞菌（P.putica)、斯氏假單胞菌（P.stutizeri)、產(chǎn)堿假單胞菌（P.alcaligenes）等。
二、生物學(xué)特性
假單胞菌屬為革蘭陰性桿菌，菌體直或微彎，無芽胞、無莢膜，有單鞭毛（銅綠假單胞菌、斯氏假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌）或叢鞭毛（熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌），運(yùn)動(dòng)活潑。
本屬細(xì)菌專性需氧，生長(zhǎng)溫度范圍廣，最適生長(zhǎng)溫度35℃（熒光假單胞菌25℃），少數(shù)細(xì)菌可在4℃（熒光假單胞菌）或42℃（銅綠假單胞菌、斯氏假單胞菌）生長(zhǎng)，可以此來鑒別細(xì)菌。細(xì)菌生長(zhǎng)的pH 5.0～9.0，最適pH值為7.0。營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)，可產(chǎn)生多種水溶性色素，主要有綠膿素（pyocyanin)和青膿素（pyoverdin)，青膿素在360 nm紫外光下可發(fā)出黃綠色熒光，故又稱熒光素。各種假單胞菌產(chǎn)生的色素見表17-2。細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng)，常在其表面形成菌膜。在麥康凱平板上生長(zhǎng)良好，各種菌在血平板上形成不同的菌落特征，根據(jù)生長(zhǎng)特性可進(jìn)行初步鑒定。
銅綠假單胞菌在普通平板上形成的菌落扁平濕潤、大小不一、邊緣不整齊、常呈融合狀生長(zhǎng)，所產(chǎn)生的綠膿素和熒光素使培養(yǎng)基被染成藍(lán)綠色或黃綠色，從臨床標(biāo)本中分離的菌株有80％～90％可產(chǎn)生綠膿素或熒光素。在血平板上生長(zhǎng)后有生姜樣氣味，形成扁平濕潤、有金屬光澤的菌落，常呈β溶血。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，24 h可形成半透明菌落，48 h后菌落中心呈棕綠色。來自肺囊性纖維化患者的菌株常形成M型菌落。
熒光假單胞菌在血平板上30℃孵育24 h后形成灰白色、扁平稍隆起、濕潤、光滑、邊緣整齊的菌落，無溶血，挑取菌落呈黏絲狀。
斯氏假單胞菌在血平板上24 h長(zhǎng)出1 mm大小菌落，大多數(shù)菌落干燥、有皺紋、粗糙、扁平，淡黃色或黃棕色，堅(jiān)韌而黏附平板；少數(shù)菌落光滑、濕潤，大部分產(chǎn)生透明溶血環(huán)。多次轉(zhuǎn)種后光滑型菌落增多，呈遷徙生長(zhǎng)及擴(kuò)散。
在血平板上產(chǎn)堿假單胞菌和惡臭假單胞菌都形成光滑、濕潤、邊緣整齊的灰色菌落，無溶血。
三、臨床意義
假單胞菌屬分布廣泛，土壤、水和空氣中均有存在，屬于條件致病菌。人感染主要來源于環(huán)境、污染的醫(yī)療器械、輸液或注射等，成為醫(yī)院感染的主要病原菌。在人類非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌屬占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，其次為惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌等。
銅綠假單胞菌不僅廣泛存在于環(huán)境中，也存在于正常人體的腸道、皮膚及外耳道，當(dāng)宿主正常的防御機(jī)制被改變或損傷時(shí)，如燒傷、留置導(dǎo)尿管、氣管切開插管等，以及免疫機(jī)制缺損時(shí)，如腫瘤患者、器官移植患者等，可導(dǎo)致皮膚、呼吸道、泌尿道、眼部等感染。當(dāng)細(xì)菌毒力強(qiáng)、數(shù)量多而機(jī)體抵抗力降低時(shí)，細(xì)菌可在血中繁殖引起敗血癥、腦膜炎。
從傷口、痰、胸腔積液、尿或血液中可分離出熒光假單胞菌。由于熒光假單胞菌具有嗜冷性，可在血庫儲(chǔ)存的血中繁殖，若輸入含有此種細(xì)菌的庫存血液或血制品，可導(dǎo)致敗血癥、感染性休克或血管內(nèi)凝血等嚴(yán)重后果，其內(nèi)毒素的磷脂部分可導(dǎo)致輸血后不可逆的休克。
惡臭假單胞菌為魚的一種致病菌，常從腐敗的魚中檢出，也可作為人類咽部的正常菌群，是人類少見的條件致病菌，偶從少、類尿道感染、皮膚感染和骨髓炎標(biāo)本中分離出，分泌物有腥臭味。惡臭假單胞菌感染通常病情較重，因?yàn)樵摼匀芎筢尫懦鰞?nèi)毒素而致中毒癥狀。
斯氏假單胞菌在人類的呼吸道、泌尿道均可發(fā)現(xiàn)，為條件致病菌，可引起原發(fā)性或繼發(fā)性感染，如呼吸道感染、中耳炎、關(guān)節(jié)炎、尿路感染及敗血癥等。
產(chǎn)堿假單胞菌廣泛存在于多種水源中，是醫(yī)療用水污染的主要原因。產(chǎn)堿假單胞菌如污染新生兒溫箱濕化用水和氧氣濕化用水，極容易導(dǎo)致新生兒呼吸道感染甚至敗血癥等。產(chǎn)堿假單胞菌還可引起化膿性腦膜炎、尿道炎、肺炎等感染性疾病。
四、微生物學(xué)檢驗(yàn)
1、檢驗(yàn)程序非發(fā)酵菌檢驗(yàn)程序見圖17-1。
圖17-1非發(fā)酵菌檢驗(yàn)程序
2、標(biāo)本采集假單胞菌屬感染常見標(biāo)本有血液、腦脊液、胸腹水、膿液、分泌液、痰、尿液等。進(jìn)行醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)時(shí)，標(biāo)本主要為病區(qū)或手術(shù)室的空氣、水、地面、把手、醫(yī)療診斷器械及生活用品。
3、直接顯微鏡檢查取標(biāo)本直接涂片、革蘭染色，鏡下可見革蘭陰性桿菌，散在排列，無芽胞。
4、分離培養(yǎng)臨床感染標(biāo)本一般直接接種于血平板及麥康凱平板，血液、腦脊液標(biāo)本經(jīng)增菌后再轉(zhuǎn)種于血平板。
5、鑒定假單胞菌屬的主要特征：革蘭陰性桿菌，專性需氧，在血平板和麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，通常產(chǎn)生明顯的水溶性色素。氧化酶陽性，葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)(O/F試驗(yàn)）為氧化型或產(chǎn)堿型，端生單或叢鞭毛，據(jù)此可與非發(fā)酵菌其他屬相區(qū)別。進(jìn)一步做系列生化試驗(yàn)進(jìn)行菌種鑒定。具體見表17-3。
表17-3臨床常見假單胞菌的鑒定特征
注：＋表示90％以上陽性；一表示90％以上陰性；V表示不定。
在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室，假單胞菌屬細(xì)菌的鑒定常采用商品化的試劑盒，以及全自動(dòng)或半自動(dòng)的細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。
從臨床標(biāo)本中分離出銅綠假單胞菌，需要排除污染，從患者血液及無菌體液、尿液中分離到本菌，特別是反復(fù)檢出者，結(jié)合臨床表現(xiàn)即可確定為病原菌感染。需連續(xù)三次痰培養(yǎng)陽性才能確立銅綠假單胞菌下呼吸道感染，如患者無感染的臨床表現(xiàn)，雖然分離到銅綠假單胞菌亦應(yīng)作為正常菌群。
6、藥物敏感試驗(yàn) 假單胞菌屬的細(xì)菌對(duì)有些抗生素天然耐藥，臨床治療假單胞菌感染的抗菌藥物主要有三類：β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和喹諾酮類。按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(CLSI）推薦，銅綠假單胞菌藥敏試驗(yàn)可選用Kirby-Bauer法。
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