一、背景
人腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞是從人腎上腺皮質(zhì)組織中分離得到的細(xì)胞系，該細(xì)胞可通過GFAP特異性抗體的免疫熒光鑒定。該細(xì)胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌。
腎上腺皮質(zhì)是構(gòu)成腎上腺外層的內(nèi)分泌腺組織。它能分泌由數(shù)種類固醇混合而成的腎上腺皮質(zhì)激素，皮質(zhì)內(nèi)還含有為數(shù)更多的類固醇。腎上腺皮質(zhì)由3層構(gòu)成，最外層為球狀帶（zona glomerulosa），接著為占大部分的束狀帶（zona fasciculata），內(nèi)層為網(wǎng)狀帶（zona seticularis）。其功能異常可以引起腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退、腎上腺皮質(zhì)增生等。
腎上腺皮質(zhì)（adrenal cortex）球狀帶分泌鹽皮質(zhì)類固醇，束狀帶分泌糖皮質(zhì)類固醇，網(wǎng)狀帶分泌腎上腺性激素。腦垂體前葉的促腎上腺皮質(zhì)素具有促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)的發(fā)育和分泌的作用，但球狀帶的活動則受血管緊張素Ⅱ的支配。腎上腺皮質(zhì)通過這些激素的分泌，對物質(zhì)代謝有重要關(guān)系，特別是參與機(jī)體對一切有害刺激的應(yīng)激反應(yīng)。另外，腎上腺皮質(zhì)激素對腦及腦垂體都具有反饋作用，從而可調(diào)整促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子和促腎上腺皮質(zhì)素的分泌。這樣，腎上腺皮質(zhì)的調(diào)節(jié)系統(tǒng)便形成反饋回路。
腎上腺皮質(zhì)區(qū)域與髓質(zhì)區(qū)域之間有著廣泛的聯(lián)系，皮質(zhì)細(xì)胞存在于髓質(zhì)區(qū)域，而嗜鉻細(xì)胞存在于皮質(zhì)區(qū)域。這兩種細(xì)胞的緊密聯(lián)系說明細(xì)胞間存在交換，也使得對兩種腎上腺內(nèi)分泌系統(tǒng)之間旁分泌信號傳導(dǎo)的深入研究提供了可能。
二、應(yīng)用
用于順式聯(lián)苯菊酯對映體對H295R細(xì)胞腎上腺皮質(zhì)激素分泌的選擇性干擾效應(yīng)研究：
研究擬除蟲菊酯類農(nóng)藥順式聯(lián)苯菊酯（cis-BF）對H295R細(xì)胞腎上腺皮質(zhì)激素分泌的選擇性干擾效應(yīng)及其作用機(jī)制。
方法：利用高效液相色譜系統(tǒng)和手性色譜柱對cis-BF兩對映體（1S-cis-BF和1R-cis-BF）進(jìn)行拆分,并通過氣相色譜系統(tǒng)和圓二色光譜儀對單個對映體分別進(jìn)行定量分析和構(gòu)型判定。選取H295R細(xì)胞為研究模型,將細(xì)胞暴露于不同濃度（0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L）1S-cis-BF/1R-cis-BF或1S-cis-BF/1R-cis-BF與8-Br-cAMP（500μmol/L）的混合物24 h,同時設(shè)置DMSO（0.1%,v/v）為溶劑對照組、8-Br-cAMP（500μmol/L）為陽性對照組。
用MTS法檢測細(xì)胞增殖活性,確定染毒濃度。用ELISA法檢測細(xì)胞上清液中皮質(zhì)醇、醛固酮水平和細(xì)胞內(nèi)cAMP含量,并用RT-qPCR法分析類固醇激素合成相關(guān)酶（StAR、P450scc、3βHSD2以及CYP17）mRNA的表達(dá)水平。
結(jié)果：cis-BF兩對映體在高效液相色譜系統(tǒng)和手性色譜柱上成功得到分離,且1S-cis-BF和1R-cis-BF純度均在99%以上。MTS結(jié)果顯示,高濃度（1、10μmol/L）1S-cis-BF/1 R-cis-BF對細(xì)胞增殖活性有刺激作用（P<0.05）,因此本研究選擇無細(xì)胞毒性濃度（0.001、0.01、0.1μmol/L）為cis-BF對映體的染毒濃度。激素測定結(jié)果顯示,與溶劑對照組相比,0.001、0.01、0.1μmol/L 1S-cis-BF/1R-cis-BF均顯著降低本底皮質(zhì)醇分泌水平（P<0.05）,且1S-cis-BF對本底皮質(zhì)醇分泌的抑制作用分別是1R-cis-BF的1.49、1.68和1.04倍,0.001、0.1mol/L 1S-cis-BF與0.1μmol/L1R-cis-BF均明顯降低本底醛固酮分泌水平（P<0.05）,在0.1μmol/L濃度組1S-cis-BF對本底醛固酮分泌的抑制作用是1R-cis-BF的2.16倍,具有顯著的對映體差異（P<0.05）;與陽性對照組相比,1S-cis-BF對8-Br-cAMP誘導(dǎo)的皮質(zhì)醇和醛固酮分泌水平隨著濃度的增加而降低,而1R-cis-BF對8-Br-cAMP誘導(dǎo)的皮質(zhì)醇和醛固酮分泌水平無明顯改變,兩對映體染毒組激素水平變化無顯著性差異。
RT-qPCR結(jié)果顯示,與溶劑對照組相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF顯著下調(diào)本底StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）,0.01、0.1μmol/L 1R-cis-BF顯著下調(diào)本底3βHSD2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）,且在0.1μmol/L濃度組,1S-cis-BF對本底StAR、3βHSD2和CYP17 mRNA表達(dá)水平的抑制作用分別是1R-cis-BF的2.23、2.04和5.00倍,具有顯著的對映體差異（P<0.05）;與陽性對照組相比,隨著濃度的升高,1S-cis-BF對8-Br-cAMP誘導(dǎo)的StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17mRNA表達(dá)水平的抑制作用越明顯,其中在0.1μmol/L濃度組3βHSD2和CYP17 mRNA表達(dá)下調(diào)幅度有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）,而1R-cis-BF對8-Br-cAMP誘導(dǎo)的此四種基因的表達(dá)有下調(diào)趨勢,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,兩對映體染毒組四種酶基因轉(zhuǎn)錄水平無統(tǒng)計學(xué)差異。
cAMP測定結(jié)果顯示,與對照組相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF染毒致細(xì)胞內(nèi)cAMP含量降低了8.10%（P<0.05）,0.1μmol/L 1R-cis-BF處理組細(xì)胞內(nèi)cAMP含量略有降低,但差異沒有顯著性,且在0.1μmol/L濃度組,1S-cis-BF的抑制作用是1R-cis-BF的1.95倍,具有顯著的對映體差異（P<0.05）。
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