一、背景
RV沙門(mén)菌增菌液體培養(yǎng)基英文全稱(chēng)是Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth，簡(jiǎn)稱(chēng)RVSEB，主要用于控制菌檢查中沙門(mén)氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)。在TSB復(fù)蘇培養(yǎng)后，取0.1ml加入10ml的RV沙門(mén)菌增菌液體培養(yǎng)基。
檢驗(yàn)原理：大豆蛋白胨在培養(yǎng)基中作為基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供所需的碳源、氮源、維生素以及一些礦物質(zhì)等元素；氯化鎂提供必需的離子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸鹽作為培養(yǎng)基的緩沖劑?？兹妇G能夠抑制非沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)。
在RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基中，鼠傷沙門(mén)氏菌為渾濁；腸炎沙門(mén)氏菌為渾濁；
乙型副傷寒沙門(mén)菌為渾濁；大腸埃希氏菌為抑制或部分抑制；金黃色葡萄球菌為抑制。
成分(g/L)：大豆胨4.5；六水合氯化鎂29.0；氯化鈉8.0；磷酸氫二鉀0.4
磷酸二氫鉀0.6；孔雀綠0.036；pH值5.2±0.2 25℃。
用法：稱(chēng)取本品27.1g，加熱攪拌溶解于1000ml純化水中，分裝試管，115℃高壓滅菌20分鐘，備用。
沙門(mén)菌是寄居在人類(lèi)動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭陰性桿菌。它是一種腸道致病菌，常常因?yàn)檎`食不潔食物引起，感染者出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉。是人類(lèi)食物中毒的主要病原之一。
由沙門(mén)氏菌引起的疾病主要分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是傷寒和副傷寒，另一類(lèi)是急性腸胃炎。其中鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌等是污染動(dòng)物性產(chǎn)品，進(jìn)而引起人類(lèi)沙門(mén)氏菌食物中毒的主要致病菌。
沙門(mén)氏菌污染主要來(lái)源于患病的人和動(dòng)物及其帶菌者，主要由其糞便、尿、乳汁以及流產(chǎn)胎兒、胎衣和羊水排出的病菌污染水源、土壤和飼料等，其中飼料和水源的污染是導(dǎo)致沙門(mén)氏菌傳染的主要原因。
二、應(yīng)用
用于沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌及單增李斯特菌的同步快速檢測(cè)方法的研究：
在本研究中,根據(jù)現(xiàn)有通用增菌液及選擇性增菌液,設(shè)計(jì)制備了一種能夠同時(shí)富集沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌及單增李斯特菌的復(fù)合增菌肉湯。
通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)挑選出合適添加劑,并采用響應(yīng)面分析對(duì)培養(yǎng)基成份進(jìn)行了優(yōu)化,最后得到SSL配方如下:胰蛋白胨17g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氫鉀2.5g/L、葡萄糖2.5g/L、丙酮酸鈉2.5g/L、甘露醇5g/L、氯化鈉15g/L、氯化鋰2g/L、亞碲酸鉀1mg/L、萘啶酮酸10mg/L。經(jīng)驗(yàn)證SSL可使得三種目標(biāo)菌以相對(duì)一致的速度進(jìn)行富集,經(jīng)過(guò)37℃150r/min振蕩培養(yǎng)24h后,菌體濃度到達(dá)107108CFU/mL,非目標(biāo)菌生長(zhǎng)受到抑制。
針對(duì)沙門(mén)氏菌的invA基因,金黃色葡萄球菌的sa442基因及單增利斯特菌的hly基因成功設(shè)計(jì)了三對(duì)引物和三條特異性探針,進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行病原菌的液相芯片檢測(cè)。經(jīng)過(guò)優(yōu)化PCR產(chǎn)物與探針雜交的溫度,得到雜交條件為52℃,20min,檢測(cè)靈敏度可達(dá)100CFU/mL。
通過(guò)人工污染樣品的檢測(cè)和實(shí)際食品樣品的檢測(cè),驗(yàn)證了SSL（S.enteritidis;S.aureus;L.monocytogens的復(fù)合增菌培養(yǎng)基）復(fù)合增菌技術(shù)及液相芯片檢測(cè)體系的檢測(cè)效果,預(yù)增菌及液相芯片檢測(cè)全過(guò)程可在24h內(nèi)完成,檢測(cè)靈敏度可達(dá)到10CFU/mL。
本研究所建立的液相芯片檢測(cè)方法在上述三種致病菌的快速和多重檢測(cè)上是可行的。結(jié)果表明其具備良好的重復(fù)性、特異性和靈敏性特點(diǎn)。與國(guó)標(biāo)法相比,檢測(cè)時(shí)間減少,準(zhǔn)確性提高,且可滿(mǎn)足多重檢測(cè)的要求。
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