一、知識(shí)背景
胎牛血清(無(wú)支原體)以健康胎牛血液為原料加工而成，經(jīng)0.65μm、0.22μm微孔濾膜預(yù)過(guò)濾，3次0.1μm微孔濾膜精過(guò)濾后，獲得成品胎牛血清。本產(chǎn)品無(wú)支原體污染、內(nèi)毒素水平極低。本產(chǎn)品已通過(guò)多種細(xì)胞培養(yǎng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞倍增速度正常。
胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。
顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。
二、營(yíng)養(yǎng)功能
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
1、提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2、提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。
4、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5、起酸堿度緩沖液作用。
6、提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
三、應(yīng)用
用于不同來(lái)源血清對(duì)成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及分化的研究：
骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(marrow mesenchymal stromal cells,MSCs)因其取材方便,可在體外大量擴(kuò)增并保持成骨潛能,較低的免疫原性,轉(zhuǎn)入外源基因后不影響其增殖、分化特性等特點(diǎn),被認(rèn)為是骨組織工程理想的種子細(xì)胞。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)方法采用胎牛血清作為營(yíng)養(yǎng)支持。盡管優(yōu)質(zhì)胎牛血清經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的處理,但仍然存在潛在傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)和免疫排斥反應(yīng)。
許多研究者采用無(wú)血清培養(yǎng)方法,但代價(jià)太高,并且周期較長(zhǎng),約40 d～45 d；應(yīng)用誘導(dǎo)劑和細(xì)胞因子,費(fèi)用也相當(dāng)可觀。尋找胎牛血清替代物并建立成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stromal cells,hBMSCs)規(guī)范、安全、高效的體外培養(yǎng)體系剛剛起步,有待進(jìn)一步研究。
采用AB血清(AB serum,ABS)、自體血清(autologous serum,AS)替代胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)作為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),比較3種不同培養(yǎng)體系體外培養(yǎng)hBMSCs增殖分化的效果,為骨組織工程由基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。研究目的探討AB血清、自體血清替代胎牛血清體外培養(yǎng)成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的效果,并初步探討其促成骨的機(jī)制。
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