節(jié)菱孢霉菌的產(chǎn)毒培養(yǎng)與外界影響及分類鑒定！
小楊 / 2024-01-31 08:53:45
節(jié)菱孢霉菌是在自然界中不常見的一類霉菌，它是分布世界各地的一種植物腐生菌。節(jié)菱孢霉菌在甘蔗產(chǎn)區(qū)(廣東、廣西)和變質(zhì)甘庶中毒發(fā)病區(qū)(主要是北方地區(qū))的甘蔗樣品中均有分布。在實(shí)驗(yàn)條件下，以麥芽汁-酵母膏產(chǎn)毒培養(yǎng)基，20℃培養(yǎng)21天，pH值4. 5時(shí)產(chǎn)毒量最高，可作為節(jié)菱孢霉菌在實(shí)驗(yàn)室的最佳產(chǎn)毒條件。
節(jié)菱孢霉菌
節(jié)菱孢霉菌是在自然界中不常見的一類霉菌，它是分布世界各地的一種植物腐生菌，我國(guó)主要從以下幾方面對(duì)其進(jìn)行了研究。
節(jié)菱孢霉菌在我國(guó)部分地區(qū)的分布
1987年羅雪云等對(duì)節(jié)菱孢霉菌在我國(guó)部分地區(qū)的分布進(jìn)行了調(diào)查研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，節(jié)菱孢霉菌在甘蔗產(chǎn)區(qū)(廣東、廣西)和變質(zhì)甘庶中毒發(fā)病區(qū)(主要是北方地區(qū))的甘蔗樣品中均有分布。在甘蔗產(chǎn)區(qū)的110份土壤樣品中均未分離出節(jié)菱孢霉菌，在中毒發(fā)病區(qū)的74份土壤樣品中，有3份樣品檢出節(jié)菱孢霉菌占4.0%，這也說明，變質(zhì)甘庶中毒主要是由于發(fā)病區(qū)貯存不當(dāng)造成霉壞變質(zhì)所致。
從麥芽汁、馬鈴薯汁、蛋白胨、酵母膏和蔗糖等成分組成的培養(yǎng)基中，篩選出了麥芽汁-蛋白脈、麥芽汁-酵母膏和馬鈴薯-酵母膏-蔗糖三種節(jié)菱孢霉菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基。節(jié)菱孢霉菌產(chǎn)毒株的三種培養(yǎng)物對(duì)小鼠的LD50分別為54.0lml/kg，55.0lml/kg和52.0ml/kg。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)影響產(chǎn)毒節(jié)菱孢霉菌產(chǎn)毒的因素進(jìn)行研究表明，實(shí)驗(yàn)室中影響產(chǎn)毒因素的程度大小排列順序?yàn)榫?gt;溫度>時(shí)間>培養(yǎng)基>pH值。在實(shí)驗(yàn)條件下，以麥芽汁-酵母膏產(chǎn)毒培養(yǎng)基，20℃培養(yǎng)21天，pH值4.5時(shí)產(chǎn)毒量最高，可作為節(jié)菱孢霉菌在實(shí)驗(yàn)室的最佳產(chǎn)毒條件。通過研究還發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)毒培養(yǎng)物在9個(gè)月的放置過程中，其3-NPA的含量未發(fā)生變化。
對(duì)此研究成果較少。通過甘蔗產(chǎn)區(qū)與中毒發(fā)病區(qū)中毒季節(jié)氣溫的對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，外界環(huán)境氣溫對(duì)甘蔗中毒的發(fā)生影響不大，間接說明了溫度對(duì)節(jié)菱孢霉菌的影響不大，與實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果不一致，需做進(jìn)一步的研究。對(duì)甘蔗霉變環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)查研究證明，不同銷售方式、甘蔗貯存條件及貯存期的長(zhǎng)短是影響霉變的重要因素。提示今后應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)影響節(jié)菱孢霉菌繁殖產(chǎn)毒因素的研究，為預(yù)防中毒提供依據(jù)。
節(jié)菱孢屬自1817年命名，該屬已分為20個(gè)種，很多學(xué)者從變質(zhì)甘蔗和中毒甘蔗中分離到了產(chǎn)毒節(jié)菱孢霉。但使甘蔗變質(zhì)而引起中毒的節(jié)菱孢霉菌究竟屬何種，這是需要解決的問題。劉興階等對(duì)163株從中毒甘庶和變質(zhì)甘蔗樣品中分離的產(chǎn)毒節(jié)菱孢霉菌進(jìn)行了分類鑒定，其中98株為甘蔗節(jié)菱孢，占60.1%；43株為蔗生節(jié)菱孢，占26.4%;22株為暗孢節(jié)菱孢，占13.5%。甘蔗節(jié)菱孢和蔗生節(jié)菱孢在我國(guó)未曾報(bào)道過，屬于國(guó)內(nèi)新紀(jì)錄。通過對(duì)來(lái)自河北、河南、內(nèi)蒙、遼寧、廣東和廣西的甘蔗分離出的菌株研究發(fā)現(xiàn)，自南方和北方采集的甘蔗中皆分離出甘蔗節(jié)菱泡和暗孢節(jié)菱孢，而蔗生節(jié)菱孢皆自北方樣品中分離出。由于甘蔗產(chǎn)地是廣東和廣西，北方采集的樣品中分離出的菌株是來(lái)自南方抑或運(yùn)至北方后才污染的，尚需進(jìn)一步研究。
3-NPA
3-NPA除是某些霉菌的代謝產(chǎn)物外，也是幾種高等植物中的有毒成分，在這方面的研究成果主要有:
1、3-NPA的檢測(cè)方法
檢測(cè)方法的建立，不僅可為實(shí)驗(yàn)研究提供方便，而且對(duì)日常甘蔗監(jiān)測(cè)也提供了依據(jù)。胡文娟等建立了薄層色譜3-NPA測(cè)定法，按該方法測(cè)定甘蔗及甘蔗樣品中3-NPA的最低檢出量為2ppm，其回收率范圍為80.0%-106.0%。劉勇等建立了血漿中3-NPA的氣相色譜-熱能檢定器測(cè)定方法，該方法靈敏度為2ng，回收率為99.23%士6.38%。
2、3-NPA的毒性
用剛斷乳小鼠按Horn法測(cè)定一次節(jié)菱孢毒素的LD50，毒素用水配制，每只小鼠灌胃0.5ml。一次毒素灌胃的LD5o，雄性小鼠為100mg/kg，雌性小鼠為68.1mg/kg。劉興階等采用Horn劑量遞增法測(cè)定剛斷乳小鼠的LD50為65、-121mg/kg。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，小鼠、大鼠、貓和狗為該毒性物質(zhì)的敏感動(dòng)物，能引起急性神經(jīng)中毒和死亡。根據(jù)對(duì)引起中毒的樣品檢測(cè)，推算出人類對(duì)3-NPA的中毒劑量為12.5mg/kg。由此可見，3-NPA對(duì)人類的毒性屬劇毒級(jí)，人類較嚙類動(dòng)物的敏感性高約5倍。
3、3-NPA在甘蔗中的分布
通過對(duì)病區(qū)河南、河北以及非病區(qū)廣東、廣西和福建的399份市售甘蔗樣品進(jìn)行3-NPA的檢測(cè)證明，北方和南方各省樣品中3-NPA的陽(yáng)性率無(wú)多大差別，然而在3-NPA的含量方面其差別顯著，南方無(wú)病例報(bào)告。由此可見，在剛收割不久的甘蔗中有約10%已被節(jié)菱孢污染，但毒素的含量則是隨貯存時(shí)間的延長(zhǎng)增加，因此控制甘蔗的貯存期是預(yù)防中毒的關(guān)鍵。有學(xué)者報(bào)道了甘蔗外觀與其含毒素的關(guān)系，外觀正常的甘蔗3-NPA陽(yáng)性率明顯低于外觀嚴(yán)重變質(zhì)的甘蔗，平均含3-NPA的量也有明顯的差別。
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