沙眼衣原體的生物學(xué)特性與微生物學(xué)診斷及檢測(cè)！
小楊 / 2024-03-02 08:50:32
一、知識(shí)簡(jiǎn)介
《伯氏系統(tǒng)手冊(cè)》(1984)的記載，將沙眼衣原體Chlamydia trachomatis 分為3個(gè)生物型，即小鼠生物型(biovar mouse)、沙眼生物型(biovar trachoma)和性病淋巴肉芽腫生物型(biovar lymphogranulomavenereum,LGV)。后二者與人類疾病有關(guān)。用間接微量免疫熒光試驗(yàn)，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14個(gè)血清型，LGV生物型又有L1、L2、L2a、L34個(gè)血清型。
二、生物學(xué)特性
(一)形態(tài)與染色
將雞胚卵黃囊或細(xì)胞培養(yǎng)的沙眼衣原體高度提純，于電鏡下檢查，可見原體呈球形或類球形，胞漿膜外有剛性細(xì)胞壁，壁外有平滑表層。始體的體積較大，形狀不甚規(guī)則，其包膜富有韌性，無(wú)剛性的細(xì)胞壁，原體和始體內(nèi)皆含有DNA與RNA。
沙眼衣原體具有特殊的染色性狀，不同的發(fā)育階段其染色有所不同。成熟的原體以Giemsa 染色為紫色，與監(jiān)色的宿主細(xì)胞漿呈鮮明無(wú)比。始體以 Giemsa 染色呈藍(lán)色。沙眼衣原體對(duì)革蘭氏染色雖然一般反應(yīng)為陰性，但變化不恒定。沙眼包涵體在上皮細(xì)胞漿內(nèi)，很致密，如以Giemsa染色，則呈深紫色，由密集的顆粒組成。其基質(zhì)內(nèi)含有糖原，以Lugol液染色呈棕褐色斑塊。
(二)培養(yǎng)
人類是沙眼衣原體的自然宿主。它主要寄生于機(jī)體粘膜上皮細(xì)胞。猴和猩猩的眼及泌尿系可實(shí)驗(yàn)感染各型沙眼衣原體(包括LGV在內(nèi))。靈長(zhǎng)類外的動(dòng)物，對(duì)LGV之外的其他沙眼衣原體均無(wú)致病性。雞胚只對(duì)大多數(shù)沙眼衣原體敏感，但禽類則對(duì)各型沙眼衣原均不敏感。小白鼠對(duì)LGV衣原體是敏感的，尤其是腦內(nèi)感染，病死率可達(dá)30%。此外，大白鼠、豚鼠和家兔對(duì)LGV衣原體的敏感性幼齡高于成年。所有沙眼衣原體都能在雞胚卵黃囊內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，并致死雞胚。將沙眼衣原體懸液接種6～8天胚齡卵黃囊內(nèi)，置35℃溫箱，一般于6～8天后死亡。剖檢時(shí)胚體及卵黃囊膜充血。卵黃囊膜涂片可散在衣原體，病理切片則可見卵黃囊膜細(xì)胞內(nèi)包涵體。
所有
沙眼衣原體均可在細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng)，現(xiàn)多采用McCoy或HeLa229細(xì)胞株，在接種衣原體前，以X線照射細(xì)胞，或于細(xì)胞培養(yǎng)中加入代謝抑制如細(xì)胞松弛素B、DEAE葡聚糖呈放線菌酮，其目的在于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝緩慢，以利于衣原體的寄生性生長(zhǎng)。
三、所致疾病
(一)沙眼：由衣原體沙眼生物變種A、B、Ba、C血清型引起。主要經(jīng)直接或間接接觸傳播，即眼～眼或眼～手～眼的途經(jīng)傳播。當(dāng)沙眼衣原體感染眼結(jié)膜上皮細(xì)胞后，在其中增殖并在胞漿內(nèi)形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵體。該病發(fā)病緩慢，早期出現(xiàn)眼瞼結(jié)膜急性或亞急性炎癥，表現(xiàn)流淚、有粘液膿性分泌物、結(jié)膜充血等癥狀與體征。后期移行為慢性，出現(xiàn)結(jié)膜瘢痕、眼瞼內(nèi)翻、倒睫、角膜血管翳引起的角膜損害，以致影響視力，最后導(dǎo)致失明。據(jù)統(tǒng)計(jì)沙眼居致盲病因的首位。1956年我國(guó)學(xué)者湯飛凡等人用雞胚卵黃囊接種法，在世界上首次成功地分離出沙眼衣原體，從而促進(jìn)了有關(guān)原體的研究。
(二)包涵體包膜炎：由沙眼生物變種D～K血清型引起。包括嬰兒及成人兩種。前者系嬰兒經(jīng)產(chǎn)道感染，引起急性化膿性結(jié)膜炎(包涵體膿漏眼)，不侵犯角膜，能自愈。成人感染可因兩性接觸，經(jīng)手至眼的的途徑或者來(lái)自污染的游泳池水，引起濾泡性結(jié)膜炎又稱游泳池結(jié)膜炎。病變類似沙眼，但不出現(xiàn)角膜血管翳，亦無(wú)結(jié)膜瘢痕形成，一般經(jīng)數(shù)周或數(shù)月痊愈，無(wú)后遺癥。
(三)泌尿生殖道感染：經(jīng)性接觸傳播，由沙眼生物變種D～K血清型引起。男性多表現(xiàn)為尿道炎，不經(jīng)治療可緩解，但多數(shù)轉(zhuǎn)變成慢性，周期性加重，并可合并副睪炎、直腸炎等。女性能引起尿道炎、宮頸炎等，輸卵管炎是較嚴(yán)重并發(fā)癥。該血清型有時(shí)也能引起沙眼衣原體性肺炎。
(四)性病淋巴肉芽腫：由沙眼衣原體LGV生物變種引起。LGV要通過(guò)兩性接觸傳播，是一種性病。男性侵犯腹股溝淋巴結(jié)，引起化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。女性可侵犯會(huì)陰、肛門、直腸，出現(xiàn)會(huì)陰～肛門～直腸組織狹窄。
四、免疫性
機(jī)體感染衣原體后，能誘導(dǎo)產(chǎn)生型特異性細(xì)胞免疫和體液免疫。但通常免疫力不強(qiáng)，且為時(shí)短暫，因而常造成持續(xù)性感染、隱性感染和反復(fù)感染。此外，也可能出現(xiàn)免疫病理?yè)p傷，由遲發(fā)型超敏反應(yīng)引起，如性病淋巴肉芽腫等。
五、微生物學(xué)診斷
多數(shù)衣原體引起的疾病可根據(jù)臨床癥狀和體征確診。但對(duì)早期或經(jīng)癥患者，須行實(shí)驗(yàn)室檢查來(lái)幫助診斷。
(一)直接涂片鏡檢
沙眼急性期患者取結(jié)膜刮片，Giemsa或碘液及熒光抗體染色鏡檢，查上皮細(xì)胞漿內(nèi)有無(wú)包涵體。包涵體結(jié)膜炎及性病淋巴肉芽腫，也可從病損局部取材涂片，染色鏡檢，觀察有無(wú)衣原體或包涵體。
(二)分離培養(yǎng)
用感染組織的滲出液或刮取物，接種雞胚卵黃囊或傳代細(xì)胞，分離衣原體，再用免疫學(xué)方法鑒定。
(三)血清學(xué)試驗(yàn)
主要用于性病淋巴肉芽腫的輔助診斷。常用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，若雙份血清抗體效價(jià)升高4倍或以上者，有輔助診斷價(jià)值。也可用ELISA、凝集試驗(yàn)。
(四)PCR試驗(yàn)
設(shè)計(jì)不同的特異性引物，應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可特異性診斷沙眼衣原體，具有敏感性高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用。
六、防治原則
沙眼無(wú)特異的預(yù)防方法，疫苗在試用，效果不肯定。注意個(gè)人衛(wèi)生，不使用公共毛巾和臉盆，避免直接或間接接觸傳染，是預(yù)防沙眼的重要措施。生殖道衣原體感染的預(yù)防同其他性病一樣。
治療一般用利福平、四環(huán)素、氯霉素、強(qiáng)力霉素及磺胺等藥物。
七、快速檢測(cè)
衣原體按其特性分為三類：沙眼衣原體(Chlamydia Trachomatis)、
鸚鵡熱衣原體(Chlamydia Psittas)和
肺炎衣原體(Chlamydia Pneumoniae)。沙眼衣原體有15個(gè)已知的血清型，其中12個(gè)血清型與沙眼和生殖道的感染有關(guān)；另外3個(gè)則與性病性淋巴肉芽腫(Lymphor Ganuloma Venereun, LGV)的發(fā)生有關(guān)。
沙眼衣原體快速檢測(cè)目前分定性和定量快速檢測(cè)。目前流行常用的為金標(biāo)定性快速檢測(cè)。其檢測(cè)原理為：用抗衣原體脂多糖單克隆抗體和羊抗鼠IgG多克隆抗體分別固定于固相硝酸纖維素膜，并和膠體金標(biāo)記的另一抗衣原體脂多糖單克隆抗體及其他試劑和原料制成，應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)，采用雙抗體夾心的形式建立的衣原體檢測(cè)方法，用于女性宮頸和男性尿道中衣原體的檢測(cè)。從而達(dá)到檢測(cè)女性宮頸和男性尿道中衣原體的存在，臨床輔助診斷衣原體感染，試驗(yàn)結(jié)果還需要臨床醫(yī)生結(jié)合患者癥狀、體征及其它檢查結(jié)果進(jìn)一步確定的目的。
金標(biāo)法定性沙眼衣原體快速檢測(cè)有著快速、方便、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)。為臨床醫(yī)生的輔助診斷等節(jié)省了很多時(shí)間。為目前市面上沙眼衣原體快速檢測(cè)的主流。
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