標(biāo)準(zhǔn)綿羊血清碳吸附過濾的知識與應(yīng)用研究！
小楊 / 2024-03-09 08:40:26
一、背景
標(biāo)準(zhǔn)綿羊血清(碳吸附過濾)是綿羊血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。
標(biāo)準(zhǔn)綿羊血清(碳吸附過濾)經(jīng)無菌采集、批量混合，最終過3次0．1um過濾分裝而成在經(jīng)過生物碳吸附補(bǔ)體等有害物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)綿羊血清(碳吸附過濾)適合于單抗研制、較常規(guī)的原代和傳代細(xì)胞培養(yǎng)、規(guī)?；囵B(yǎng)的疫苗生產(chǎn)。
碳吸附過濾根據(jù)吸附過程中，活性炭分子和污染物分子之間作用力的不同，可將吸附分為兩大類;物理吸附和化學(xué)吸附(又稱活性吸附)。在吸附過程中，當(dāng)活性炭分子和污染物分子之間的作用力是范德華力(或靜電引力)時稱為物理吸附;當(dāng)活性炭分子和污染物分子之間的作用力是化學(xué)鍵時稱為化學(xué)吸附。
物理吸附的吸附強(qiáng)度主要與活性炭的物理性質(zhì)有關(guān)，與活性炭的化學(xué)性質(zhì)基本無關(guān)。由于范德華力較弱，對污染物分子的結(jié)構(gòu)影響不大，這種力與分子間內(nèi)聚力一樣，故可把物理吸附類比為凝聚現(xiàn)象。物理吸附時污染物的化學(xué)性質(zhì)仍然保持不變。
碳吸附型血清是一款低水平類固醇類的血清產(chǎn)品，通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度，如雌二醇、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、B類維生素、T3、T4、前列腺素等，該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結(jié)果的實驗中對于那些需要這些分子的細(xì)胞培養(yǎng)，可能降低細(xì)胞生長性能。
二、應(yīng)用
用于Lnc-SEMT促進(jìn)綿羊肌肉分化生成的功能研究：
通過高通量測序的手段篩選到一個的可以促進(jìn)綿羊肌肉細(xì)胞分化,促進(jìn)成肌生成的LncRNA分子(命名為Lnc-SEMT),試驗分析發(fā)現(xiàn)它對骨髂肌發(fā)育具有重要調(diào)控作用.該分子的研究為闡明動物肌細(xì)胞的增殖、分化的分子機(jī)制具有重要意義,并可為肉羊分子輔助育種和開發(fā)新型的促生長制劑提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。
1、通過對胚胎期90口和120日齡綿羊背最長肌樣品進(jìn)行高通量測序,共計得到1114個lncRNA,其中466個lncRNA差異表達(dá),而466個差異表達(dá)的lncRNA中,其中157個lncRNA上調(diào),309個lncRNA下調(diào)。
2、通過對測序得到的1114個lncRNA進(jìn)行芯片驗證,發(fā)現(xiàn)有867個預(yù)測的lncRNA存在,其中有119個lncRNA的表達(dá)上調(diào),對這119個lncRNA進(jìn)行定量篩選后,得到了一個在骨骼肌組織中特異性高表達(dá)的上調(diào)LncRNA(命名為Lnc-SEMT)。
3、通過檢測綿羊不同生長時期的Lnc-SEMT表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),在胚胎期120日齡時,其表達(dá)量最高,出生后逐漸降低,成年后表達(dá)水平變化不大。
4、通過檢測綿羊成肌細(xì)胞生長分化過程中的lncRNA表達(dá)量變化,在成肌細(xì)胞分化0-5天內(nèi),隨著成肌細(xì)胞的生長分化,MYOG和MYOD基因表達(dá)水平也隨著升高。
5、構(gòu)建了Lnc-SEMT的高表達(dá)和干擾載體,分別轉(zhuǎn)染到綿羊成肌細(xì)胞,通過DAPI和MyHC試驗分析,結(jié)果表明隨著成肌細(xì)胞分化過程中Lnc-SEMT的過表達(dá)和干擾,MYOG,MYOD等基因隨著Lnc-SEMT的變化而變化。
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