C8-D1A鼠小腦細(xì)胞凍存與傳代處理方法及應(yīng)用！
小楊 / 2024-03-27 09:39:59
一、細(xì)胞簡(jiǎn)介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：C8-D1A
種屬：小鼠
年齡（性別）：
組織來源：
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：神經(jīng)細(xì)胞樣
背景描述
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
用途：(種屬鑒定正確)
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、收到凍存細(xì)胞的處理方法
1、37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2、從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；
3、在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4、棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5、置于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6、第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
三、細(xì)胞傳代
1、當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，給細(xì)胞傳代；
2、37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
3、在超凈臺(tái)中，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS清洗細(xì)胞后，再加入1ml胰酶消化細(xì)胞；
4、顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
5、用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；
6、將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm離心5min；
7、棄上清，加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度大于1×104cells/cm2，混勻細(xì)胞懸液，確保均勻分布；
8、將培養(yǎng)瓶置于37°C，5%CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
四、應(yīng)用
用于超短波通過調(diào)節(jié)MK2/TNF-α通路抑制炎癥反應(yīng)促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)研究：
超短波（USW）治療在臨床上越來越受到廣泛關(guān)注。USW作用廣泛,可擴(kuò)張局部血管,改善局部血液循環(huán)和組織營養(yǎng),還可以消炎鎮(zhèn)痛,提高神經(jīng)肌肉興奮性和生物活性。USW曾被報(bào)道對(duì)SCI有保護(hù)作用。炎性反應(yīng)是脊髓繼發(fā)性損傷的一個(gè)重要環(huán)節(jié),一般持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng),損傷范圍較廣。
其中最常見的炎性因子是TNF-α及IL-1β,在細(xì)胞毒性反應(yīng)中起非常重要作用。絲裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2（MK2）及其介導(dǎo)的炎癥參與SCI。MK2參與調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、肌動(dòng)蛋白重構(gòu)以及炎癥反應(yīng)等。MK2還參與關(guān)節(jié)炎、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病、急性胰腺炎以及銀屑病等疾病的炎癥反應(yīng)過程。
H2O2處理的C8-D1A星形膠質(zhì)細(xì)胞中,MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比顯著升高（P<0.01）。3、在體外細(xì)胞模型中,H2O2組和H2O2+USW組的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）。而與H2O2組相比,H2O2+USW組的MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）。與對(duì)照組相比,H2O2組和H2O2+USW組的細(xì)胞凋亡水平顯著升高（P<0.01）。而與H2O2組相比,H2O2+USW組的細(xì)胞凋亡水平顯著降低（P<0.01）。
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