克魯維畢赤酵母：用于生產(chǎn)與教學(xué)及發(fā)酵植物性材料
小楊 / 2024-03-27 09:48:11
克魯維畢赤酵母是Pichia屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。主要用途為研究；教學(xué)；生產(chǎn)，具體用途為發(fā)酵植物性材料。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Pichia Kluyveri
屬名：Pichia
種名加詞：kluyveri
來源歷史：←甘肅省科學(xué)院生物研究所(51615)
收藏時(shí)間：2008.11.21
原始編號(hào)：咸7
資源歸類編碼：15151113125
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；教學(xué)；生產(chǎn)
具體用途：發(fā)酵植物性材料
特征特性：細(xì)胞卵形，長形到圓柱形；單個(gè)成雙或成鏈；在液體中形成皺狀菌膜；形成假菌絲；發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵蔗糖，麥芽糖；同化葡萄糖，不同化可溶性淀粉，麥芽糖；不同化硝酸鉀；在無維生素生長陽性；耐受5％NaCl。
生物危害程度：四類
致病對象：無
分離基物：咸菜
培養(yǎng)基：*12 Brix. 麥芽汁 1.0L，瓊脂 15.0g，pH自然。[注] 麥芽汁制備：大麥芽若干，粉碎后，加入4倍于麥芽重量的水，攪拌均勻，在55～60℃保溫箱內(nèi)糖化4h，取出過濾，得麥芽汁，測量此麥芽汁的體積和濃度后，分裝于已滅菌的三角瓶中，0.6kg/cm2滅菌40min備用，用時(shí)將濾液稀釋至所需糖度。
培養(yǎng)溫度：25℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：真空冷凍干燥法
實(shí)物狀態(tài)：有實(shí)物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：研究；教學(xué)；生產(chǎn)；發(fā)酵植物性材料
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、形態(tài)特征
細(xì)胞卵形，長形到圓柱形；單個(gè)成雙或成鏈；在液體中形成皺狀菌膜，形成假菌絲；發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵蔗糖，麥芽糖；同化葡萄糖，不同化可溶性淀粉，麥芽糖；不同化硝酸鉀；在無維生素生長陽性；耐受5％NaCl。
三、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請放-20°C 保存。甘油請置于-80 度。
四、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
五、注意事項(xiàng)
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支平板或者斜面）；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長，這時(shí)需較長的培養(yǎng)時(shí)間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
4）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請?jiān)谑盏骄姾?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。
六、單層凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥并抽真空保存的，，開啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作為保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長，如在說明書建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成；有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說，菌種穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4、暫不啟開的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。
5、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
6、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
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