凝結(jié)芽孢桿菌的測定方法之樣品準(zhǔn)備與平板培養(yǎng)！
小楊 / 2024-03-29 09:00:31
凝結(jié)芽孢桿菌的測定方法
1、蛋白胨稀釋液的制備:
將1g蛋白胨(細(xì)菌蛋白胨除外)溶于1000ml去離子水中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0，滅菌溫度為121℃。時(shí)長15分鐘。
2、微量元素溶液制備:
微量元素水溶液營養(yǎng)成分的組成如表1所示
3、液化GYE瓊脂培養(yǎng)基的制備:
營養(yǎng)成分的組成如表2所示
使用乳酸溶液調(diào)節(jié)上述營養(yǎng)成分混合液pH到6.3。將混合液轉(zhuǎn)移到大錐形瓶中，向錐形瓶中加入15.0g瓊脂。使用鋁箔包裹錐形瓶，將其放置于加熱板上進(jìn)行加熱，并攪摔，直到瓊脂完全溶解。隨后在高壓滅菌鍋中在121℃下進(jìn)行至少15分鐘滅菌。待高壓滅菌鍋可以安全打開時(shí)，將錐形瓶放置于50℃的水浴中。
4、樣品準(zhǔn)備
4.1 食品取樣
稱取25g樣品，置于無菌均質(zhì)袋中，加225ml滅菌蛋白胨水，拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)至完全溶解于蛋白胨水，混勻。
注:若樣品不能完全溶于蛋白胨水，需要將蛋白胨水預(yù)熱至50C再加入樣品，或加入樣品后將混合懸浮液置于50℃預(yù)熱5min,直至樣品完全溶解。
4.2 檢查混合懸浮液pH值。若pH小于7.0，用氫氧化鈉(5N)溶液調(diào)節(jié)pH至8.5±0.2;若pH大于8.7，用鹽酸溶液(5N)調(diào)節(jié)pH至8.5±0.2。
4.3 樣品移取20-30ml均質(zhì)懸浮液于50ml離心管中于75℃水浴30min,立即冷卻至45℃以下，然后移液。
4.4 移取1.0ml該液于9.0ml滅菌蛋白胨水的試管中，渦旋徹底混勻(10-2稀釋管即得)。
4.5 根據(jù)要求重復(fù)操作。所做稀釋度及平板培養(yǎng)所用稀釋度應(yīng)隨預(yù)期孢子數(shù)變化而變化。
注1:將每個(gè)稀釋度溶液混勻，然后移液;
注2:步驟4.3:將離心管置于水浴后立即開啟計(jì)時(shí)器。
5、平板培養(yǎng)
液化GYE瓊脂培養(yǎng)基，然后置于水浴中冷卻至50℃以下(該培養(yǎng)基容易凝固，要置于50℃左右的水浴鍋內(nèi)) ;每個(gè)稀釋度準(zhǔn)備兩個(gè)無菌培養(yǎng)皿。分別從最后兩個(gè)稀釋管溶液中加1.0ml于相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿中，然后將15至20ml的熔融培養(yǎng)基倒至各個(gè)培養(yǎng)皿，徹底混勻。待固化時(shí)，將平板翻轉(zhuǎn)，40℃+2℃培養(yǎng)48小時(shí)，同時(shí)準(zhǔn)備一個(gè)只包含瓊脂培養(yǎng)基及一個(gè)只含有1.0ml蛋白胨稀釋液和瓊脂培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
6、平板計(jì)數(shù)
菌落數(shù)在30至300之間的平板計(jì)數(shù)最為理想。平板計(jì)數(shù)只記錄滿足以下條件的菌落:瓊脂表面的菌落需要直徑為1mm到5mm;白色到奶色，凸面，具有完整的邊緣和光滑的表面。嵌在瓊脂培養(yǎng)基中的菌落需要直徑為0. 5mm-1mm在瓊脂中具有奶色的點(diǎn)狀體。
6.1 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g(ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。
6.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式(1)計(jì)算:
N= ∑C/ (n1+0.1n2)d........................ (1)
式中:
N-樣品中菌落數(shù):
∑C - 平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和:
n1 - 第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
n2 - 第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
d - 稀釋因子(第一稀釋度)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！