兔膀胱基質(zhì)成纖維細胞的使用方法與注意事項！
小楊 / 2024-04-02 09:42:57
一、細胞簡介
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：原代細胞
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、細胞詳述
膀胱是一個儲尿器官。它是一個囊形結構，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱基質(zhì)成纖維細胞作為膀胱上皮細胞的支持細胞，起著十分重要的作用。體外培養(yǎng)膀胱基質(zhì)成纖維細胞不僅為組織工程膀胱，尿道提供種植細胞的必要手段，也是研究膀胱纖維化的基礎與前提。
三、細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常膀胱組織。
2)細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
四、產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
五、使用方法
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1、取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2、貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3、懸浮細胞處理
1)收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；
2)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細胞沉淀；
3)加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞；將分散好的細胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37°C、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)若遇到懸浮細胞團塊較大，無法機械吹散時，向步驟2)中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37°C溫浴2-3min，消化結束后，加入胰酶抑制劑(或血清)終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細胞；1200rpm離心5min，棄上清，收集細胞沉淀；
5)加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37°C、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
4、細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1%FBS，促進貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5、細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
六、注意事項
1、培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2、在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3、傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4、建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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