高加索酸奶遲緩乳桿菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容！
小楊 / 2024-04-02 10:05:48
高加索酸奶乳桿菌是Lactobacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。菌落乳白色，中等大小，邊緣大多不整齊，長桿和中長桿；異型發(fā)酵，都能利用葡萄糖，果糖，不從半乳糖、甘露醇、山梨醇產(chǎn)酸。多糖粘度420 mpa.s。主要用途為研究；生產(chǎn)，具體用途為生產(chǎn)開菲爾乳。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Lentilactobacillus Kefiri
拉丁名稱：Lactobacillus sp.
來源歷史：←江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司
收藏時間：2016/1/11
原始編號：HSLZ-75
原產(chǎn)國：中國
資源歸類編碼：15131319101
模式菌株：模式菌株(新種)
主要用途：分類；研究
特征特性：37℃厭氧培養(yǎng)7天，菌落圓形，灰白色，表面光滑，邊緣整齊。菌體桿狀，0.4-0.5 μm×1.5-3.5 μm，單個、成對或成堆排列。 16S rRNA序列接受號為KT783533。
具體用途：分類學(xué)研究。
生物危害程度：四類
培養(yǎng)基編號：CM0006
培養(yǎng)基名稱：MRS培養(yǎng)基
培養(yǎng)基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸鈉 5.0g，檸檬酸二銨 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH6.8。
培養(yǎng)溫度：37℃
需氧類型：厭氧
分離基物：醋醅
采集地：江蘇省
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
提供形式：凍干物
用途：分類學(xué)研究。
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一種）、原種（二種）和栽培種（三種）三。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備 ，其中(1)～(4)為孢子制備過程。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍廣的微生物保存法。
五、注意事項(xiàng)
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細(xì)菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、試管斜面菌種請盡快轉(zhuǎn)接，不建議長期存放。
3、初次使用時請按照本說明書推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和
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