耐冷嗜冷芽孢桿菌的菌株培養(yǎng)與實驗內(nèi)容及保存方法！
小楊 / 2024-04-09 10:05:20
耐冷嗜冷芽孢桿菌是Psychrobacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為北冰洋，在中國分離。主要用途為研究，具體用途為極地細菌。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Psychrobacillus Psychrodurans
拉丁名稱：Psychrobacillus psychrodurans
來源歷史：MCCC
原產(chǎn)國：中國
模式菌株：否
生物安全級別：一級
其它保藏中心編號：MCCC 1A09458
培養(yǎng)基編號：102.0
培養(yǎng)基成分：2216.0
培養(yǎng)溫度：15℃
培養(yǎng)時間：24-48h
需氧類型：好氧
分離基物：土壤/河邊水草根際土
保存方法：冷凍干燥管保藏
用途：研究
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、形態(tài)特征
耐冷嗜冷芽孢桿菌，與模式菌株P(guān)sychrobacillus psychrodurans DSM 11713(T) AJ277984相似性為99.744%(Diff/Total nt 2/780)；在M2培養(yǎng)基上25℃生長7天，菌落呈圓形，奶油色不透明，表面光滑不濕潤，邊緣規(guī)則，無暈環(huán)，中央微凸起，直徑約1mm；在15℃海水LB培養(yǎng)基上生長3天，蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶（三丁酸甘油酯法）陰性；在2216E培養(yǎng)基上25℃生長5天,不產(chǎn)嗜鐵素。
三、菌種的培養(yǎng)
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
四、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃):是適用范圍最廣的微生物保存法。
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