尼泊爾葡萄球菌的培養(yǎng)條件與注意事項(xiàng)及保藏方法！
小楊 / 2024-04-22 09:08:46
尼泊爾葡萄球菌是Staphylococcus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國(guó)。主要用途為研究，具體用途為釀造豆瓣，產(chǎn)乳酸。
一、菌種簡(jiǎn)介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Staphylococcus Nepalensis
拉丁名稱(chēng)：Staphylococcus nepalensis
來(lái)源歷史：←中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所
收藏時(shí)間：2018/3/1
原始編號(hào)：JN-6(MR)10.1
原產(chǎn)國(guó)：中國(guó)
資源歸類(lèi)編碼：15131315101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：菌落圓形，濕潤(rùn)，邊緣光滑，白色。細(xì)胞圓形，單個(gè)或葡萄狀排列，G+。酸性和兼性環(huán)境下可生長(zhǎng)，含10%NaCl培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在有葡萄糖的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中可產(chǎn)生乳酸。
具體用途：釀造豆瓣，產(chǎn)乳酸。
生物危害程度：四類(lèi)
培養(yǎng)基編號(hào)：CM0002
培養(yǎng)基名稱(chēng)：營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂
培養(yǎng)基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。
培養(yǎng)溫度：30℃
需氧類(lèi)型：好氧
分離基物：后酵期郫縣豆瓣（發(fā)酵3個(gè)月）
采集地：四川省成都市郫都區(qū)
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
提供形式：凍干物
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、形態(tài)特征
尼泊爾葡萄球菌，菌落圓形，濕潤(rùn)，邊緣光滑，白色。細(xì)胞圓形，單個(gè)或葡萄狀排列，G+。酸性和兼性環(huán)境下可生長(zhǎng)，含10%NaCl培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在有葡萄糖的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中可產(chǎn)生乳酸。
三、菌株特點(diǎn)
1、該菌為需氧芽孢桿菌，細(xì)菌繁殖體G蘭氏染色陰性呈紫色，細(xì)菌芽胞孔雀綠著色。其細(xì)菌繁殖體對(duì)培養(yǎng)基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨瓊脂上生長(zhǎng)良好，表面粗糙呈米黃色。
2、適生長(zhǎng)繁殖濕度為56－65℃，培養(yǎng)24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。
3、本生物指示劑載體為高級(jí)濾紙片，染菌量為5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封裝在小紙袋內(nèi)，熱死亡時(shí)間為121℃，3.9 min陽(yáng)性，19 min陰性；D10值1.3－1.9 min，符合美國(guó)藥典第十一版規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。
4、該菌無(wú)毒，熱抗穩(wěn)定，在冰箱內(nèi)4℃下保存一年抗力無(wú)明顯下降，在常溫（20℃左右）可保存1個(gè)月。
四、培養(yǎng)條件
1、營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾水1.0L，pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。
2、需氧類(lèi)型：好氧
3、培養(yǎng)溫度：55℃
五、注意事項(xiàng)
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間：細(xì)菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。
2、試管斜面種請(qǐng)盡快轉(zhuǎn)接，不建議長(zhǎng)期存放。
3、初次使用時(shí)請(qǐng)按照本說(shuō)明書(shū)推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類(lèi)型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我司不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全儲(chǔ)存和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
六、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過(guò)氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類(lèi)、甘油、二甲亞砜等。
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