溶血性鏈球菌檢驗的主要內(nèi)容與適用范圍及操作步驟！
小楊 / 2024-04-20 09:43:54
1、主題內(nèi)容與適用范圍
本標準適用于食品和食物中毒樣品中溶血性鏈球的檢驗。
2、引用標準
GB 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 染色法、培養(yǎng)基和試劑
3、設(shè)備和材料
3．1 溫箱：36±1℃。
3．2 水?。?6±1℃。
3．3 顯微鏡。
3．4 離心機。
3．5 試管架。
3．6 滅菌平皿。
3．7 滅菌小試管。
3．8 載玻片。
3．9 滅菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 滅菌鑷子。
3．11 均質(zhì)器。
3．12 酒精燈。
3．13 接種環(huán)。
4、培養(yǎng)基和試劑
4．1 葡萄糖肉浸液肉湯：按GB 4789.28 中 4.1 規(guī)定，在肉浸液肉湯內(nèi)加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉湯：按 GB 4789.28 中 4.1 規(guī)定。
4．3 匹克氏肉湯：按 GB 4789.28 中 4.62 規(guī)定。
4．4 血瓊脂平板：按 GB 4789.28 中 4.6 規(guī)定。
4．5 人血漿。
4．6 0.25%氯化鈣。
4．7 滅菌生理鹽水。
4．8 桿菌肽藥敏紙片（含 0.04 單位）。
5、檢驗程序
6、操作步驟
6．1 樣品處理
稱取 25 g 固體檢樣；稱取 25 mL 液體檢樣，加入 225 mL 滅菌生理鹽水，研成勻漿制成混懸液。
6．2 一般培養(yǎng)
將上述混懸液吸取 5 mL，接種于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉湯；或直接劃線接種于血平板，如檢樣污染嚴重，可同時按上述量接種匹克氏肉湯，經(jīng) 36±1℃培養(yǎng) 24 h，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色，并進行鏈激酶試驗及桿菌肽敏感試驗。
6．3 形態(tài)與染色
本菌呈球形或卵圓形，直徑0.5～1 µm，鏈狀排列，鏈長短不一，短者4～8個細胞組成，長者 20～30 個，鏈的長短常與細菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)；液體培養(yǎng)中易呈長鏈；在固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運動。
6．4 培養(yǎng)特性
該菌營養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)基上生長不良，在加有血液、血清培養(yǎng)基中生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉淀。血平板上菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5～0.75 mm，為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌周圍有 2～4 mm 界限分明、無色透明的溶血圈。
6．5 鏈激酶試驗
致病性
乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶（即溶纖維蛋白酶） ，此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，使成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。 吸取草酸鉀血漿 0.2 mL，加0.8 mL 滅菌生理鹽水，混勻，再加入 18～24 h36±1℃培養(yǎng)的鏈球菌培養(yǎng)物 0.5 mL 及 0.25%氯化鈣 0.25 mL（如氯化鈣已潮解，可適當加大至 0.3%～0.35%） ，振蕩搖勻，置于 36±1℃水浴中 10 min，血漿混合物自行凝固（凝固程序至試管倒置，內(nèi)容物不流動） 。然后觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如 24 h 后不溶解即為陰性。
草酸鉀人血漿配制：草酸鉀0.01 g 放入滅菌小試管中，再加入5 mL人血，混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液即為草酸鉀人血漿。
6．6 桿菌肽敏感試驗
挑取乙型溶血性鏈球菌液， 涂布于血平板上， 用滅菌鑷子夾取每片含有 0.04單位的桿菌肽紙片，放于上述平板上，于 36±1℃培養(yǎng) 18～24 h，如有抑菌帶出現(xiàn)即為陽性。同時用已知陽性菌株作為對照。
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