嗜鹽纖細(xì)芽孢桿菌的培養(yǎng)方法與注意事項(xiàng)及打管說明！
小楊 / 2024-04-23 09:24:22
嗜鹽纖細(xì)芽孢桿菌是Gracilibacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。芽孢菌綱革蘭氏陽性桿菌。主要用途為分類學(xué)研究，具體用途為模式菌株。
一、菌種簡(jiǎn)介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Gracilibacillus Halophilus
拉丁學(xué)名：Gracilibacillus halophilus
原始編號(hào)：YIM-C55.5
菌株來源：←云南大學(xué)
保藏人：崔曉龍
直接來源國家：中國
保藏時(shí)間：4/29/2006
其他保藏編號(hào)：=DSM 17856
生物危害：四類
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株
培養(yǎng)溫度：45℃
培養(yǎng)基：0221
分離源：鹽堿土樣
采集地點(diǎn)：青海省
采集國家：中國
用途：模式菌株
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
三、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶菌種請(qǐng)置于-20°C 保存。
四、注意事項(xiàng)
1) 首次活化，用盡量少的復(fù)水液溶解，接種在 5ml 的液體培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)，如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和
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五、單層安瓿瓶凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥并抽真空保存的，開啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作為保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長，如在說明書建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長起來，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成；有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4、暫不啟開的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。
5、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
6、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
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