HMSC-bm人骨髓間充質干細胞的復蘇與傳代實驗步驟！
小楊 / 2024-04-23 09:38:13
人骨髓間充質干細胞來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細胞，MSCs可以在體內或體外特定的誘導條件下，分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、內皮等多種組織細胞。
細胞簡介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：HMSC-Bm
產品簡稱：HMSC-bm
細胞數(shù)量：1*10^6
組織來源：骨髓
形態(tài)特征：紡錘形，成纖維樣
生長方式：貼壁生長
背景描述：骨髓來源的人間充質干細胞，具備分化成脂肪、成骨和軟骨的能力。據(jù)報道，該細胞CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166表達陽性，CD14、CD31、CD34、CD45表達陰性。
培養(yǎng)條件：MSC專用培養(yǎng)基；空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng)
換液頻率：2-3天
傳代比例：1：3
凍存液配方：70%完全培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO
安全性：BSL-1
供應限制：僅供科研
運輸方式：常溫運輸（T25培養(yǎng)瓶）
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）
細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需復蘇的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心 ，調至 1000 轉/分 ，時長 10 分鐘
4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀 ，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 完全培養(yǎng)基 ，計數(shù) ，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中
細胞傳代操作說明（貼壁細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計 ，吸出完全培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時間視細胞而定），后用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。
細胞傳代操作說明（懸浮細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。
細胞凍存操作說明
實驗儀器：超凈工作臺，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶，需凍存的細胞，移液槍，槍頭，離心管，凍存管，記號筆
實驗步驟：
1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。
3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉放-20℃ 1.5～2 h ，再轉人-70℃ 4-12 h 后即可轉移到液氮內(- 196℃) ，并登記。
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