小鼠食管平滑肌細胞接收后的處理方法與培養(yǎng)步驟！
小楊 / 2024-04-28 09:35:09
一、細胞簡介
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：原代細胞
培養(yǎng)條件：原代細胞取組織現(xiàn)分
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）
二、細胞詳述
食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動物的食管結構上由內向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層、外膜。食管平滑肌集中在肌層，僅在食管的下 2/3段存在，其中中段的 1/3位骨骼肌和平滑肌混合組成，下 1/3段全部為平滑肌，而上段1/3全部為骨骼肌。
食管的運動，上部的橫紋肌受舌咽神經(jīng)和迷走神經(jīng)的支配，這些運動神經(jīng)元末梢以運動終板形式進入骨骼肌。迷走神經(jīng)尚支配食管其余部分的平滑肌，其節(jié)前纖維末梢與食管壁內神經(jīng)叢的節(jié)細胞發(fā)生突觸聯(lián)系，再發(fā)出節(jié)后纖維支配平滑肌細胞。在吞咽時，吞咽中樞興奮通過上述運動神經(jīng)元和迷走神經(jīng)傳出纖維，引起食管各段的肌肉發(fā)生蠕動。食管壁內神經(jīng)叢可以不依賴外來神經(jīng)來控制食管蠕動。
三、細胞特性
1)細胞來源于人正常食管組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于 90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。
四、產品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存 1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過 85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
五、產品使用
1)本產品僅能用于科研
2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核
3)本產品未通過用于活體診斷的審核
六、培養(yǎng)步驟
（1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
（2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3、輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4、按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
（3）細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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