綠色糖單孢菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及打管說(shuō)明！
小楊 / 2024-04-28 09:48:29
綠色糖單孢菌，只在氣絲上產(chǎn)生單個(gè)孢子，偶爾2個(gè)孢子相連。產(chǎn)生抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的熱綠菌素(thermoviridin)。主要用于教學(xué)與研究。
一、菌種簡(jiǎn)介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Saccharomonospora Viridis
拉丁學(xué)名：Saccharomonospora viridis
原始編號(hào)：NRRL B-3044
菌株來(lái)源：←NRRL
保藏人：周玉瑤
直接來(lái)源國(guó)家：美國(guó)
保藏時(shí)間：3/1/1980
其他保藏編號(hào)：=
ATCC 15386 =CBS 484.63 =BCRC 13426 =DSM 43017 =CGMCC 4.1324 =CGMCC 4.1483 =JCM 3036 =NBRC 12207
生物危害：四類
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株
培養(yǎng)溫度：45℃
培養(yǎng)基：0236
分離源：Peat
采集國(guó)家：愛(ài)爾蘭
用途：模式菌株
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、菌種屬性
蔗糖硝酸鹽瓊脂：基絲很少或無(wú)。甘油天冬素瓊脂：無(wú)氣絲?；z貧乏。營(yíng)養(yǎng)瓊脂：氣絲灰綠色。基絲無(wú)色，反面暗綠色?？扇苌匕稻G色。葡萄糖酵母精瓊脂：氣絲少，白色變灰綠色。基絲中等或良好。燕麥粉瓊脂：氣絲微白色，少?；z貧乏。馬鈴薯瓊脂(加或不加0.2%酵母精 )：氣絲微綠色?；z中等或良好。馬鈴薯塊：不生長(zhǎng)。明膠4天液化。牛奶凝固。淀粉水解強(qiáng)。硝酸鹽還原很少。不產(chǎn)生類黑色素和H2S。生長(zhǎng)適溫55℃；生孢子適溫 45℃；27℃和65℃不生長(zhǎng)；37℃生長(zhǎng)良好。產(chǎn)生抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的熱綠菌素(thermoviridin)。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過(guò)濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、注意事項(xiàng)
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無(wú)菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無(wú)菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過(guò) 2 支平板或者斜面，若接種液體培養(yǎng)基，則試管液體不超過(guò) 5ml 為宜）；
2）經(jīng)過(guò)冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
4）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降或不活，請(qǐng)?jiān)谑盏胶?2 個(gè)月內(nèi)和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系，逾期不予受理；
7）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
8）安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
9）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。
六、單層安瓿瓶?jī)龈晒艽蚬苷f(shuō)明書(shū)
1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥并抽真空保存的，開(kāi)啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作為保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長(zhǎng)，如在說(shuō)明書(shū)建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)起來(lái)，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成；有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，一般來(lái)說(shuō)菌種穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4、暫不啟開(kāi)的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。
5、凍干管打開(kāi)后需一次用完，不能留存。
6、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
下載附件
上一篇：小鼠食管平滑肌細(xì)胞接收后的處理方法與培養(yǎng)步驟！
下一篇：解葡聚糖微桿菌的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)及微生物培養(yǎng)方法！