泡盛曲霉的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及研究進(jìn)展！
小楊 / 2024-05-31 09:56:19
泡盛曲霉，拉丁學(xué)名（Aspergillus awamori），泡盛曲霉分布廣泛，存在于土壤、空氣及各種腐敗的有機(jī)物上，分生孢子靠氣流傳播。真菌、細(xì)菌和酵母菌都能產(chǎn)生阿魏酸酯酶，但絕大多數(shù)阿魏酸酯酶來(lái)源于真菌。已發(fā)現(xiàn)有超過30種微生物能產(chǎn)生阿魏酸酯酶，如泡盛曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉、米曲霉、塔賓曲霉、出芽短梗霉、耐熱梭狀芽孢桿菌、熱纖梭菌等。
一、菌種簡(jiǎn)介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Aspergillus Awamori
屬名：Aspergillus
種名加詞：awamori
來(lái)源歷史：←黑龍江省輕工科學(xué)研究院（L11）←黃?；瘜W(xué)工業(yè)研究社
收藏時(shí)間：2005.12.30
原始編號(hào)：黃海324
資源歸類編碼：15151913102
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；生產(chǎn)
具體用途：生產(chǎn)淀粉酶和單寧酸。
特征特性：分生孢子頂囊呈黑色，邊緣裂開成放射圓柱體，分生孢子梗光滑。最適生長(zhǎng)溫度為30-35℃。
生物危害程度：四類
致病對(duì)象：無(wú)
培養(yǎng)基：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，F(xiàn)eSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH6.0～6.5。
培養(yǎng)溫度：28-32℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：真空冷凍干燥法
實(shí)物狀態(tài)：有實(shí)物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
源數(shù)據(jù)主鍵：40494
用途：研究；生產(chǎn)；生產(chǎn)淀粉酶和單寧酸。
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、真菌簡(jiǎn)介
拉丁學(xué)名：Aspergillus awamori
拉丁別名：Aspergillus luchuensis Inui
分類：cellular organisms; Eukaryota; Fungi/Metazoa group; Fungi; Ascomycota; Pezizomycotina; Eurotiomycetes; Eurotiales; Trichocomaceae; mitosporic Trichocomaceae; Aspergillus
分布：分布廣泛，存在于土壤、空氣及各種腐敗的有機(jī)物上，分生孢子靠氣流傳播。
用途：葡萄糖淀粉酶生產(chǎn)菌種。在印度尼西亞，中國(guó)，日本，米根霉被用來(lái)發(fā)酵生產(chǎn)食品和酒精飲料。
形態(tài)：菌落疏松，不易挑起。
培養(yǎng)：培養(yǎng)基：土豆浸出汁100ml，葡萄糖2g。24℃培養(yǎng)。
保藏溫度：-70 攝氏度
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)ph→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、研究進(jìn)展
麥麩、玉米皮、蔗渣的主要成分是纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等具有功能活性的細(xì)胞壁物質(zhì)，作為農(nóng)副產(chǎn)物，它們年產(chǎn)量很大，但由于較少對(duì)其進(jìn)行深加工和再利用，使得這些農(nóng)產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)附加值很低，若能對(duì)其中的功能成分進(jìn)行開發(fā)和綜合利用，可大大提高農(nóng)產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。在構(gòu)成這些物質(zhì)的多糖側(cè)鏈殘基上，存在一種重要的生理活性物質(zhì)———阿魏酸。阿魏酸常以酯鍵與細(xì)胞壁多糖以醚鍵與木質(zhì)素交聯(lián)形成一種復(fù)雜的“網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)”，是當(dāng)歸、川芎、阿魏等中藥的重要功能成分之一。
阿魏酸具有多種生理功能，如清除自由基、抗紫外線輻射、抗血栓、降血脂、防治冠心病、抗菌消炎、止痛、抗突變、防癌、增強(qiáng)精子活力以及調(diào)節(jié)人體免疫等。阿魏酸酯酶（E.C.3.1.1.73，F(xiàn)AE）又稱肉桂酸酯酶，屬羧酸酯水解酶的一個(gè)亞類，是能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯鍵，將阿魏酸游離出來(lái)的一種胞外酶。在食品工業(yè)中，可利用阿魏酸酯酶打斷阿魏酸與細(xì)胞壁材料，如麩皮、秸稈中多糖的交聯(lián)，高效降解多糖并獲得反式阿魏酸，它是重要的功能性食品基料；在飼料工業(yè)中，可利用阿魏酸酯酶處理植物性的原材料，將阿魏酸從植物細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)中游離出來(lái)，破壞細(xì)胞壁的骨架結(jié)構(gòu)，木質(zhì)素、半纖維素及纖維素之間的連接被部分打破，結(jié)構(gòu)變疏松，原料更容易被牲畜消化吸收，提高了飼料的利用效率。可見，阿魏酸酯酶具有廣闊的應(yīng)用前景。
1987年MackenzieCR等培養(yǎng)橄欖鏈霉菌時(shí)發(fā)現(xiàn)阿魏酸酯酶能分解阿魏酸與麥麩相連的酯鍵，把阿魏酸從麥麩中釋放出來(lái)，研究表明，真菌、細(xì)菌和酵母菌都能產(chǎn)生阿魏酸酯酶，但絕大多數(shù)阿魏酸酯酶來(lái)源于真菌。已發(fā)現(xiàn)有超過30種微生物能產(chǎn)生阿魏酸酯酶，如
泡盛曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉、米曲霉、塔賓曲霉、出芽短梗霉、耐熱梭狀芽孢桿菌、熱纖梭菌等。
方園等人以3株泡盛曲霉為菌種，篩選出產(chǎn)阿魏酸酯酶酶活力最高的菌株，研究并得出其產(chǎn)酶的最佳工藝條件：麥麩∶蔗渣2∶1(W∶W)，4%(NH4)2SO4，0.23%CuSO4，固液比1∶1，在溫度28℃下發(fā)酵3d，酶活達(dá)到0.0679U/g。
I-HsinLee等人采用
泡盛曲霉發(fā)酵黑豆曲，結(jié)果表明，由于發(fā)酵微生物產(chǎn)生的β-葡糖苷酶的催化作用，發(fā)酵能顯著提高黑豆曲的總酚和花青素含量，抗氧化活性也有顯著提高。
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