ATCC BAA-125耐鹽芽孢桿菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容！
小楊 / 2024-06-05 10:10:07
耐鹽芽孢桿菌是Bacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。主要用途為研究；教學(xué)。
一、菌種簡介
規(guī)格：Freeze-Dried
拉丁屬名：Bacillus Halodurans
用途：ATCC原裝進(jìn)口
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、詳細(xì)描述
Bacillus halodurans Nielsen et al. 拉丁名
Strain Designations 菌株別名 JCM 9153 [C-125, FERM 7344]
Application 用途 Produces beta-galactosidase beta-D-galactosidase Produces xylan endo-1,3-beta-xylosidase xylan hydrolase, xylanase Biotechnology
Isolation 分離基物 Soil, 1977
Biosafety Level 生物安全等級(jí) 1
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
Product Format 提供形式 freeze-dried
Storage Conditions 生長條件
Frozen 冷凍物: -80°C or colder
Freeze-Dried 凍干物: 2°C to 8°C
Live Culture: See Propagation Section
Preceptrol? no
Genome Sequenced Strain Bacillus halodurans C-125 DNA, complete genome.
Type Strain 模式菌株 no
Comments 注釋 Genome sequenced strain
Medium 培養(yǎng)基 ATCC? Medium 18: Trypticase Soy Agar/Broth
Growth Conditions 生長條件
Temperature 培養(yǎng)溫度: 37°C
Atmosphere需氧情況: Aerobic
Name of Depositor 寄存人 JCM
Chain of Custody 來源國家 ATCC <-- JCM <-- K Horikoshi
Isolation 分離基物 Soil, 1977
References 參考文獻(xiàn) Takami H, Horikoshi K. Reidentification of facultatively alkaliphilic Bacillus sp. C-125 to Bacillus halodurans. Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 943-945, 1999.
JCM, personal communication
Cross References Nucleotide (GenBank) : BA000004 Bacillus halodurans C-125 DNA, complete genome.
三、形態(tài)特征
革蘭氏陽性、桿菌、有芽孢、菌落形態(tài)為圓形、中間凸起、邊緣整齊、白色、光滑、透明；多數(shù)運(yùn)動(dòng)；鞭毛典型側(cè)生；有機(jī)化能營養(yǎng)；嚴(yán)格好氧或間性厭氧；形成內(nèi)生孢子；不形成絲狀體；暴露與空氣中不妨礙孢子的形成；營養(yǎng)體的最高生長大約從25℃到75℃以上；最低生長溫度大約在5℃到45℃。
四、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)ph→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
六、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。
微生物菌種查詢網(wǎng)作為中國微生物菌種中心引航者，單位代為引進(jìn)美國ATCC微生物菌種保藏中心，德國DSMZ菌種保藏中心，荷蘭CBS菌種保藏中心，日本JCM微生物菌種保藏中心，包括其中的ATCC微生物細(xì)菌與噬菌體（18382）；細(xì)胞系和雜交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代細(xì)胞（146）；原生動(dòng)物和藻類（2428）；干細(xì)胞（102）；載體，克隆與分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引進(jìn)進(jìn)口微生物菌種貨期短，質(zhì)量保證，UPS國際快遞運(yùn)輸。
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