主要用于研究和生產(chǎn)及葡萄酒后熟的：酒酒球菌
小楊 / 2024-07-25 08:46:18
酒酒球菌（Oenococcus oeni，O.oeni）是葡萄和葡萄酒中主要的乳酸菌種類，它是一種營養(yǎng)缺陷型細菌，能夠在葡萄酒惡劣條件下生存，在葡萄酒蘋果酸-乳酸發(fā)酵（malolactic fermentation，MLF）中擔任主要角色，是葡萄酒最終風味的塑造者。
一、菌種簡介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Oenococcus Oeni
屬名：Oenococcus
種名加詞：oeni
來源歷史：←美國引進（ML34）
收藏時間：1986.00.00
資源歸類編碼：15131317000
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；生產(chǎn)
具體用途：用于葡萄酒后熟。
特征特性：G+，菌體球形，多數(shù)單個排列。發(fā)酵果糖、阿拉伯糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖。接觸酶陰性，精氨酸雙水解酶陰性，從葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兼性厭氧。10℃生長，37℃生長，45℃不生長，10％乙醇生長。產(chǎn)乳酸。
生物危害程度：四類
致病對象：無
培養(yǎng)基：蛋白胨 10.0g，酵母膏 5.0g，MnSO4 0.05g，番茄汁(v/v) 250.0ml，葡萄糖 10.0g，MgSO4 0.2g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 750.0ml，pH4.8。[注] 番茄汁為全汁，105kg/cm2滅菌15min。接種前每10ml培養(yǎng)基用無菌操作加入常壓煮沸15min的1.0%(W/V) 半胱氨酸鹽酸鹽溶液0.5ml。
培養(yǎng)溫度：25℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：真空冷凍干燥法
實物狀態(tài)：有實物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
源數(shù)據(jù)主鍵：6057
用途：研究；生產(chǎn)；用于葡萄酒后熟。
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
三、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
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