冠突曲霉的儲存條件與培養(yǎng)方法及注意事項有哪些？
小楊 / 2024-07-30 09:06:23
冠突曲霉是Aspergillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。主要用途為研究，具體用途為六堡茶發(fā)酵試驗用，產(chǎn)生抗氧化活性物質(zhì)。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Aspergillus Cristatus
拉丁名稱：Aspergillus cristatus
來源歷史：←安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院
收藏時間：2014-08-11
原始編號：AHA-UG418
原產(chǎn)國：中國
資源歸類編碼：15151913102
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究；生產(chǎn)
具體用途：研究表明，通過該微生物的發(fā)酵使得茶湯的澄清度，亮度得到較高提升，并產(chǎn)生了特殊的菌花香氣，有研究表明該菌發(fā)酵能夠產(chǎn)生特異的酵素成分，如茯茶素。
生物危害程度：四類
培養(yǎng)基名稱：馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)
培養(yǎng)基成分：馬鈴薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，瓊脂 15.0g，pH自然。[注] 馬鈴薯提取液：取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1.0L煮沸30min，濾去馬鈴薯塊，將濾液補(bǔ)足至1.0L。
培養(yǎng)溫度：28℃
需氧類型：好氧
分離基物：茯磚茶
采集地：陜西咸陽市
保存方法：-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：研究；生產(chǎn)；研究表明，通過該微生物的發(fā)酵使得茶湯的澄清度，亮度得到較高提升，并產(chǎn)生了特殊的菌花香氣，有研究表明該菌發(fā)酵能夠產(chǎn)生特異的酵素成分，如茯茶素。
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、儲存條件
凍干菌種和試管斜面請置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌種請置于-20℃冷凍。
三、培養(yǎng)條件
1、培養(yǎng)基編號：CM0077
2、培養(yǎng)基成分：5°Bé麥芽汁 1.0L，瓊脂 15.0g，自然 pH。
3、需氧類型：好氧
4、培養(yǎng)溫度：28℃
四、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
五、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細(xì)菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、試管斜面菌種請盡快轉(zhuǎn)接，不建議長期存放。
3、初次使用時請按照本說明書推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系或更換新的菌種。
六、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉檫試凍干管表面進(jìn)行消毒，將管頂端于酒精燈外焰上均勻加熱；立即滴 2-3 滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂；再用鑷子或其他適宜工具敲下破裂處。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取 0.5ml 左右液體培養(yǎng)基(固體培養(yǎng)基去掉瓊脂即可)于凍干管中將凍干菌粉全部溶解。將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻，并取 100μL 轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基上。將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng)。
3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在 2-8℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，需要轉(zhuǎn)接至 2-3 代恢復(fù)活力。
4、復(fù)蘇后的菌種在傳 1-2 代后使用。
5、暫不啟開的安瓿管應(yīng)于 4℃中保藏（特殊除外）。
6、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
7、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
8、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
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