嚙齒糞桿菌的培養(yǎng)方法與活化操作步驟及注意事項！
小楊 / 2024-07-31 08:39:32
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干粉/培養(yǎng)物
拉丁屬名：Faecalibaculum Rodentium
其他編號：=KCTC15484
生長條件：37°C；3-7天；嚴格厭氧（改良PYG培養(yǎng)基或哥倫比亞血平板）
存儲條件：2-8℃
安全等級：1
形態(tài)：G＋（藍紫色），桿菌，純度：純
分離基物：faeces, female C57BL/6 J mouse
模式菌株：yes
用途：研究
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)基
改良PYG培養(yǎng)基（英文名：PYG MEDIUM (modified)）：胰酪蛋白胨 5.0g，蛋白胨 5.0g，酵母提取物10.0g，牛肉提取物5.0g，葡萄糖5.0g，磷酸氫二鉀 2.0g，吐溫80 1.0ml，CaCl2·2H2O 0.01g，MgSO4·7H2O 0.02g，磷酸氫二鉀 0.04g，磷酸二氫鉀0.04g，碳酸氫鈉 0.4g，氯化鈉0.08g，刃天青1.0mg，蒸餾水 1.0L，pH7.2±0.2（25℃）。加熱煮沸（建議持續(xù)沸騰3-5分鐘），CO2環(huán)境下冷卻，每100ml添加0.5mg氯化血紅素、0.1mg維生素K1和0.05g半胱氨酸鹽酸鹽，N2環(huán)境下分裝試管，121℃滅菌15分鐘，備用。
三、實驗操作步驟
①準(zhǔn)備 1 支φ18mm 試管液體培養(yǎng)基，約 10mL（提前置于厭氧環(huán)境除氧 24h）；
②在厭氧環(huán)境下，用移液槍或吸管吸取0.5-1mL菌液轉(zhuǎn)接到新的液體培養(yǎng)基中；
③將液體試管置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，菌液渾濁即可使用。
四、菌株活化步驟
凍干粉活化，將菌粉甩至底部，將尖頭一側(cè)用酒精消毒后敲開，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌種管中，輕輕彈至菌粉混合均勻，用無菌吸頭全部吸出溶解液，全部接種至2支斜面上培養(yǎng)。注意真空菌種管一旦敲開里面的凍干粉就必須全部被用掉，留著也沒用。如果有不明白之處，應(yīng)先與我司聯(lián)系，避免不必要的損失。
五、培養(yǎng)注意事項
1、微生物菌種應(yīng)保存于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；
2、菌種操作在無菌條件下進行，接種完畢應(yīng)該滅菌再做丟棄處理；
3、斜面菌種和穿刺菌種保存時間通常為 3-6 個月，應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時結(jié)轉(zhuǎn)；凍干粉保存時間通常是 2-25 年；甘油菌保存時間為 2-5 年;
4、凍干首-次活化,干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培養(yǎng)液或者無菌水溶解,接種在1-2個平板上，因凍干菌種處于休眠狀態(tài),請勿接種多個平板，以免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功。
5、如果有不明白之處，應(yīng)先與我中心聯(lián)系，避免不必要的損失。
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