ATCC 25940 埃氏巨球形菌的培養(yǎng)方法與打管說明！
小楊 / 2024-08-09 09:10:24
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Megasphaera Elsdenii
拉丁學(xué)名：Megasphaera elsdenii
原始編號：JCM 1772
菌株來源：←JCM
保藏人：周宇光
直接來源國家：日本
保藏時間：11/15/2000
其他保藏編號：=
ATCC 25940 =CCUG 6199 =DSM 20460 =KCTC 5187
生物危害：四類
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株
培養(yǎng)溫度：37℃
培養(yǎng)基：0288
其他培養(yǎng)條件
分離源：羊瘤胃
提供形式：凍干物
用途：模式菌株
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細菌用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進入,以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。保護性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細胞成分的構(gòu)型。保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。
四、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，如在說明建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
3、初次使用時請嚴格按照本說明書推薦條件和操作步驟進行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負責(zé)任。
4、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時，在操作過程中應(yīng)嚴格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
五、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂（應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇），用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml（建議勿超過 0.5ml）適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂)，滴入管內(nèi)，輕輕振蕩，待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀，在用無菌吸管吸取全部菌懸液接在 1-2 支建議的培養(yǎng)基試管中（不超過 2 支，單位所提供的培養(yǎng)基配方中有瓊脂，請務(wù)必做成試管斜面，配方中沒有瓊脂，試管中液體培養(yǎng)基不超過 5ml），并在建議的條件下靜止培養(yǎng)。
3、凍干管打開后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護設(shè)備中進行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠離面部，保護眼睛。
5、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
6、菌種復(fù)蘇時，請務(wù)必記錄好菌種的編號和制備批號，否則不予售后。
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