終極腐霉的知識簡介與形態(tài)描述及微生物培養(yǎng)方法！
小楊 / 2024-08-23 09:02:01
終極腐霉，屬于真菌界真菌門鞭毛菌亞門藻狀菌綱霜霉目，菌落在CMA上呈放射狀。菌絲發(fā)達，分枝繁茂，粗 2.3-9.8μm。主要用于教學(xué)，研究。
一、菌種簡介
提供形式：斜面培養(yǎng)物
拉丁屬名：Globisporangium Ultimum
拉丁學(xué)名：Globisporangium ultimum
原始編號：GuoLD00088
菌株來源：←中國科學(xué)院微生物研究所
保藏人：郭良棟
直接來源國家：中國
保藏時間：8/27/2015
其他保藏編號
生物危害：四類
模式菌株：非模式菌株
培養(yǎng)溫度：25℃
培養(yǎng)基：0421
分離源：果園地土壤
采集地點：北京頤和園
采集國家：中國
用途：研究
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、基本信息
編號：PR9.00318
拉丁綱名：Phycomycetes
中文綱名：藻狀菌綱
拉丁目名：Peronosporales
中文目名：霜霉目
拉丁科名：Pythiaceae
中文科名：腐霉科
拉丁名：Pythium ultimum
定名人：Trow
采集地：云南 (339)，云南 (246)，山西 (168)，江蘇 (168)，貴州 (168)
三、形態(tài)描述
菌落在CMA上呈放射狀。菌絲發(fā)達，分枝繁茂，粗2.3-9.8μm。菌絲膨大體近球形，多間生，少數(shù)切生或頂生，直徑14-32（平均23.4）μm。藏卵器球形、平滑，多頂生，較少間生，罕切生，直徑13-30 （平均22.4）μm。雄器囊狀，彎曲，多同絲生，無柄，緊靠藏卵器形成，偶有下位生和異絲生，7.7-15.5μm×5.5-10.3μm，平均10.87μm ×6.79μm；授精管明顯可見，粗約1.5μm；每一藏卵器有雄器1（-2）個。卵孢子球形、平滑，不滿器，直徑10-25（平均19.2）μm，壁厚0.9-2.8（平均1.92）μm，內(nèi)含貯物球和折光體各一個。
四、研究討論
Drechsler（1927）說 Pythium ultimum Trow常被誤鑒定為P. debaryanum Hesse。Van Luijk（1934）認為Hesse（1874）的P. debaryanum的圖頗為可疑，但他并未推翻其名稱，并認為de Bary（1881）所描述的菌就是P. debaryanum；他寧愿用P. debaryanum Hesse em. de Bary這個名稱，而不用P. ultimum。盡管de Bary的描述與 Trow對P. ultimum的描述甚為接近而與Hesse對P. debaryanum的描述則相差甚遠。 de Bary與Trow的描述有一不同點是前者繪圖描述了下位生雄器，而后者卻未提及。但是，Plaats-Niterink（1981）和本文作者認為這種雄器甚為罕見，僅在少數(shù)分離物中出現(xiàn)。 P. ultimum與P. paroecandrum Drechsler的區(qū)別是前者藏卵器多頂生、缺間生雄器，后者藏卵器多間生并具間生雄器。P. ultimum與其鄰近種的主要區(qū)別是它具有袋或囊狀的同絲生雄器、厚壁的卵孢子以及球形的菌絲膨大物和孢子囊。Drechsler（1960a）根據(jù)在室溫條件下能釋放游動孢子而建立了P. ultimum Trow var. sporangiiferum Drechsler變種，而P. ultimum則自動成為原變種P. ultimum Trow var. ultimum。
Pythium ultimum Trow最初從英國腐敗的水芹幼苗上分離出，報道分布甚廣，它不僅棲息在土壤中，還廣泛侵染大豆、菜豆、豌豆、甘薯、松苗、咖啡、蘋果、柑橘、桃、棉花、菊花、大麗花、南瓜、西瓜、甘蔗、苜蓿、番茄等150余種經(jīng)濟植物，引起苗枯，猝倒、根腐、腳腐、枯萎等多種病害。
五、微生物培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟：
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展,使之分布均勻。
六、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
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