MO3.13人少突膠質(zhì)細胞的復蘇與傳代及凍存實驗操作步驟！
小楊 / 2024-08-30 09:12:59
細胞簡介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：MO3.13
細胞別稱：M03.13
種屬：人
生長特性：貼壁細胞
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長培養(yǎng)基：DMEM+20% FBS+1% P/S
凍存條件：凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
推薦傳代比例：1:4-1:10
推薦換液頻率：2-3次/周
組織來源：膠質(zhì)
細胞類型：雜交細胞系
生物安全等級：1
用途：STR鑒定正確
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）
實驗儀器：超凈工作臺，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，水浴鍋，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基，胎牛血清，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶，需復蘇的細胞，移液槍，槍頭，離心管
實驗步驟：
1、從液氮罐中取出凍存管，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子，移液槍吸出細胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心 ，調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ，時長 10 分鐘
4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細胞沉淀，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 完全培養(yǎng)基，計數(shù)，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中
細胞傳代操作說明（貼壁細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達到 80% ，可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計 ，吸出完全培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時間視細胞而定），后用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細胞，鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。
細胞傳代操作說明（懸浮細胞）
實驗儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡 ，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清，三抗
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶，需傳代的細胞，移液槍，槍頭，離心管
實驗步驟：
1、細胞于培養(yǎng)箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細胞，鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。
細胞凍存操作說明
實驗儀器：超凈工作臺，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，離心機
實驗試劑：DMEM 培養(yǎng)基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO
實驗材料：T25 細胞培養(yǎng)瓶，需凍存的細胞，移液槍，槍頭，離心管，凍存管，記號筆
實驗步驟：
1、取待凍存的細胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細胞懸液。
3、細胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h ，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設設備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：吡咯菌素伯克霍爾德氏菌的特點與優(yōu)勢及微生物培養(yǎng)！
下一篇：ATCC 19907 微白黃鏈霉菌的培養(yǎng)與保存及應用！