西藏不動(dòng)桿菌的菌株培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及注意事項(xiàng)!
小楊 / 2024-09-09 08:48:18
不動(dòng)桿菌廣泛分布于自然界、醫(yī)院環(huán)境與健康人的皮膚、呼吸道、消化道和泌尿生殖道中,為條件致病菌,尤其是易在各類醫(yī)用材料上黏附且可以長期存活,是引起醫(yī)院感染的常見病原菌。
一、菌種簡介
規(guī)格:凍干粉
拉丁屬名:Acinetobacter Tibetensis
拉丁名稱:Acinetobacter tibetensis
模式菌株:是
來源歷史:←西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測研究所
收藏時(shí)間:03 22 2022 12:00AM
原始編號:Y-23
特征特性: LB培養(yǎng)基,25℃培養(yǎng)36 h,菌落圓形、乳白色、光滑、有光澤、中間凸起邊緣整齊、表明濕潤半透明、革蘭氏陰性。最適生長條件為:1% NaCl、25℃、pH(5.0-9.0)。(G+C)mol%為40.68%。
參考用途:分類學(xué)研究
生物危害程度:四類
致病對象:無
分離基物:土壤
采集地:西藏自治區(qū)拉薩市城關(guān)
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基:0033 LB培養(yǎng)基
蛋白胨:10.0 g
酵母浸粉:5.0 g
NaCl:10.0 g
瓊脂:15.0 g
蒸餾水:1000.0 mL
pH:7.0
以上成分121℃,滅菌15 min。液體培養(yǎng)基不加瓊脂。推薦使用成品培養(yǎng)基。
培養(yǎng)溫度:25 ℃
需氧類型:好氧
用途:研究
注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法:
①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法:
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃):是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項(xiàng)
1)凍干首次活化,干粉要全部用完,不能預(yù)留,用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無菌水溶解,接種在 2 個(gè)斜面上,因凍干粉處于休眠狀態(tài),請勿接種多支斜面或平板,以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功;如有不明白之處,請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員,避免不必要的損失;
2)微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方,室溫放置時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致菌種衰退;
3)菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行;轉(zhuǎn)種完畢,應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理;
4)應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接,凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年;
5)菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降,應(yīng)及時(shí)和
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