牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基的配方及實驗步驟與操作方法！
小楊 / 2024-09-09 09:17:21
一、背景知識
牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基是一種應(yīng)用十分廣泛的天然培養(yǎng)基，其中的牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，NaCl提供無機鹽。
由于水中細菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數(shù)僅是一種近似值。本實驗應(yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細菌總數(shù)。一般是采用普通
牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。
二、配方
牛肉膏：3.0g
蛋白胨：10.0g
NaCl：5.0g
瓊脂：15-25g
水：1000ml
pH：7.4-7.6
三、實驗步驟與操作方法
1、稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。
2、溶化
在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。
3、調(diào)pH
在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，則用1mol/L HCl進行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
對于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進行（使用方法，可參考有關(guān)說明書）。
4、過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結(jié)果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗無需過濾）。
5、分裝
按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。
分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。
6、加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實驗后面）。
7、包扎
加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。
8、滅菌
將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。
9、擱置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10、無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。
11、簡要步驟
在燒杯內(nèi)加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2～7.6,分裝在各個試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌：1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15~30分鐘。
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